Springen naar inhoud

De pgemt easy vector


  • Log in om te kunnen reageren

#1

DarkRogue

    DarkRogue


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 11 mei 2009 - 20:21

Hallo mede wetenschappers

Ik heb niet echt een discussie punt maar meer een vraag. Ik werk momenteel met het pGEMT easy vector.
Het verhaal: Ik heb PCR producten met daaraan een restritie site. Naar mijn weten vraagt de restrictie enzymen behorend tot de restrictie sites, veel nucleotiden om correct te knippen. Nu zegt mijn stage begeleider dat dit de reden is dat ik het PCR product (insert) eerst in de pGEMT easy vector moet plaatsen alvorens ik het uit deze vector knip en in een Flag tag vector plaats.
Nu mijn probleemstelling: waarom is het niet mogelijk om het PCR product direct in de Flag tag vector te plaatsen? Gezien je de Flag tag vector met dezelfde restrictie enzymen wordt opgeknipt..

Alvast bedankt.

Groetjes
DarkRogue

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Mrtn

    Mrtn


  • >1k berichten
  • 4220 berichten
  • VIP

Geplaatst op 12 mei 2009 - 00:47

Weet je zeker dat je de pGEM T vector (Promega) niet gaat gebruiken om je vector in een bacterie te zetten?

Vaak is dat een stap die nodig is om je plasmide (met insert) te vermenigvuldigen. Denk aan open knippen, insert erin ligeren en het geheel in een bacterie zetten (transformeren, DH5alpha E. coli bijvoorbeeld). Je groeit dan een aantal kolonies op een plaat en vervolgens in een vloeibare cultuur om later het construct eruit te maxi/midi/mini- preppen. Vaak doe je dan ook nog een colonyPCR en sequence reactie om zeker te weten dat je construct is wat je denkt dat het is (met de juiste oriŽntatie).
Vaak wordt dit proces klonen of kloneren te noemen, waarvan de laatste overigens een onzin-term is.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-

#3

DarkRogue

    DarkRogue


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 12 mei 2009 - 06:50

Hey dank je voor je reactie

Ja het is zeker de promega vector en ik transformeer het inderdaad in de DH5 alfa. Maar dit herhaal ik ook wanneer ik het insert uit de pGEMT easy vector haal en in de pCMV3TAG1a vector ligeer. Dus snap ik nog steeds niet waarom ik het in de pGEMT easy vector eerst plaats.

#4

Mrtn

    Mrtn


  • >1k berichten
  • 4220 berichten
  • VIP

Geplaatst op 12 mei 2009 - 08:52

Welke restrictie enzymen gebruik je voor de reacties en wat zijn hun knip-eigenschappen (welke sequentie pakken ze, waar knippen ze, wat laten ze achter, etc) ?
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures