Springen naar inhoud

Het juiste gen vinden en isoleren


  • Log in om te kunnen reageren

#1

die hanze

    die hanze


  • >250 berichten
  • 441 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 11 november 2009 - 19:08

Hoe isoleren ze een gen uit een genoom? Ik weet dat er enzymen zijn om het dna in stukken te knippen maar hoe laat je die juist het gen dat je nodig hebt uit de duizenden anderen er uit te pikken ?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8250 berichten
  • VIP

Geplaatst op 11 november 2009 - 19:15

daar gebruik je geen restrictie enzymen voor. In principe zullen specifieke primers en een PCR reactie worden gebruikt om een gen te isoleren. Dit kan op genomisch maar net zo goed (en voor mijzelf gebruikelijker) op cDNA.
"Meep meep meep." Beaker

#3

Mrtn

    Mrtn


  • >1k berichten
  • 4220 berichten
  • VIP

Geplaatst op 12 november 2009 - 02:14

Hm, aan de vraag te zien heb je daar misschien iets meer uitleg bij nodig.
Restrictie enzymen knippen heel specifieke sequenties van het DNA. Ze hebben een sequentie die ze herkennen en dan knippen ze bijvoorbeeld na de A in TCGACG. Je kan daarmee een genoom aan flarden knippen maar dan weet je nog niet welk fragment je gen bevat.
Met een PCR kan je een primer kiezen (maken) die zů specifiek is voor een bepaald stukje dat hij alleen daar zal hechten. Die primer zal dus maar op ťťn plek in het genoom hechten (als je het goed hebt gekozen) en vanuit daar kan je een PCR draaien om een kopie te maken van het gen. Dat kun je daarna wel weer wat opschonen door er stukjes af te knippen bijvoorbeeld.
Wiki over PCR en een goed plaatje.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-

#4

spark

    spark


  • 0 - 25 berichten
  • 25 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 26 november 2009 - 21:15

Aan de hand van een gen- en restrictiekaart van het fragment waar je het gen uit wilt halen kun je achterhalen welk restrictieenzym je het best kunt gebruiken. Na het knippen kun je inderdaad een PCR doen, alleen heb je hiervoor wel specifieke primers nodig.. als die er niet zijn kun je de fragmenten eventueel in een vector ligeren en dmv bacterien het fragment vermenigvuldigen (de laatste methode wou ik toch nog even toevoegen)

#5

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8250 berichten
  • VIP

Geplaatst op 27 november 2009 - 09:42

Direct een PCR doen zonder eerst een restrictie uit te voeren kan prima,dat is geen enkel probleem. Verder is het veel lastiger om zonder een PCR je gen in een vector te ligeren. Simpelweg doordat je hoeveelheid DNA lager is (tenzij je met een veel grotere hoeveelheid sample begint.)

Tevens zal je in je getransformeerde bacterie niet alleen het fragment amplificeren, het hele construct zal geamplificeerd worden.
"Meep meep meep." Beaker

#6

Mr.Darwin

    Mr.Darwin


  • 0 - 25 berichten
  • 1 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 09 mei 2012 - 14:18

Ik snap nog steeds niet hoe men een deel gewenst (enkelstrengig) DNA kan amplificeren tot precies op het einde van je gewenst DNA (in het geval dat daar geen restrictiesite voorkomt). Het begin van je stukje is precies bepaald door die primer, maar hoe zit het met dat einde?

#7

Mrtn

    Mrtn


  • >1k berichten
  • 4220 berichten
  • VIP

Geplaatst op 09 mei 2012 - 14:50

In de eerste cyclus loopt het polymerase zo lang als je het tijd geeft. Dat geeft vrijwel altijd een te lang product, maar wat gebeurt er met die te lange fragmenten in de tweede cyclus? Waar hechten de primers zich na stap 4 in figuur 2?
Zie hier
Overigens zullen die twee enkele strengen (ssDNA) weer een dubbele worden: een kort stukje dsDNA.

Als je er niet uit komt, teken het voor jezelf.. stap voor stap.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures