Springen naar inhoud

LDH isolatie, activiteit en gehalte


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Denizx

    Denizx


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 10 september 2005 - 00:09

Hallo,

Ik moet LDH uit een runderhart isoleren en de activiteit en gehalte bepalen.

Pyruvaat + NADH <-> lactaat + NAD+ + H+
Het gaat volgens deze reactie. Hiermee ga ik spectrofotometrisch de activiteit van LDH bepalen. Aan de hand van de afname van NADH kan je de activiteit bepalen zover ik me nog kan herinneren, maar of ik ermee ook op de een of andere wijze de LDH-gehalte kan bepalen, weet ik niet zeker. Ik weet alleen dat de formules te ingewikkeld waren en dat ik op een gegeven moment op tilt sloeg. :shock:

Kan iemand me nou duidelijk vertellen hoe ik het kan doen of welke formules ik moet gebruiken aub:?:

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Sophia?

    Sophia?


  • >250 berichten
  • 323 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 september 2005 - 02:54

Als dit een "gewoon" studentenpracticum is, zul je niet alles zelf hoeven doen, omdat dit een vrij bewerkelijk proces is.
Voor de isolatie van LDH zul je de cellen moeten lyseren, een eiwitprecipitaat moeten maken en vervolgens met gelelectrophorese het betreffende eiwit moeten isoleren (LDH kent 5 isovormen; ik weet niet welke hiervan specifiek in het hart voorkomen (volgens mij LDH1 en -2). Na een isolatie is een activiteitsbepaling echter niet zo interessant, omdat je de in vitro activiteit meet en niet de in vivo activiteit.
Als het je dus puur te doen is om de LDH activiteit zoals die in het levende hart geweest is, kun je het beste simpelweg de pH bepalen, met een paar goede controle metingen erbij (LDH is betrokken bij de anaerobe verbranding), of je kan een lysaat maken van de hartcellen en hierin een lactaat-bepaling doen.
Het is voor mij allemaal wat oude stof, dus de details weet ik niet meer. Maar, als je de formule die je noemt in acht neemt en de standaardwaarden voor de betrokken stoffen opzoekt, hoef je ze alleen maar na te meten. Puur voor de activiteit is een pH meting denk ik het makkelijkste...

groet

#3

sdekivit

    sdekivit


  • >250 berichten
  • 704 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 september 2005 - 15:22

LDH-activiteit is prima te meten middels een spectrometrische bepaling (colorimetrie). Je moet dan inderdaad een lysaat maken en dan bij verschillende aantallen rotaties per minuut de kernen, mito's enz eruit vissen. Hiermee is ook goed te bepalen waar in de cel LDH actief is.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures