LDH isolatie, activiteit en gehalte

Moderator: ArcherBarry

Forumregels
(Middelbare) school-achtige vragen naar het forum "Huiswerk en Practica" a.u.b.
Zie eerst de Huiswerkbijsluiter
Reageer

Bericht 10-09-'05, 01:09

Denizx

Berichten: 6

LDH isolatie, activiteit en gehalte

Hallo,

Ik moet LDH uit een runderhart isoleren en de activiteit en gehalte bepalen.

Pyruvaat + NADH <-> lactaat + NAD+ + H+

Het gaat volgens deze reactie. Hiermee ga ik spectrofotometrisch de activiteit van LDH bepalen. Aan de hand van de afname van NADH kan je de activiteit bepalen zover ik me nog kan herinneren, maar of ik ermee ook op de een of andere wijze de LDH-gehalte kan bepalen, weet ik niet zeker. Ik weet alleen dat de formules te ingewikkeld waren en dat ik op een gegeven moment op tilt sloeg. :shock:

Kan iemand me nou duidelijk vertellen hoe ik het kan doen of welke formules ik moet gebruiken aub:?:
Omhoog

Bericht 10-09-'05, 03:54

Sophia?

Gebruikersavatar
Berichten: 323

Re: LDH isolatie, activiteit en gehalte

Als dit een "gewoon" studentenpracticum is, zul je niet alles zelf hoeven doen, omdat dit een vrij bewerkelijk proces is.

Voor de isolatie van LDH zul je de cellen moeten lyseren, een eiwitprecipitaat moeten maken en vervolgens met gelelectrophorese het betreffende eiwit moeten isoleren (LDH kent 5 isovormen; ik weet niet welke hiervan specifiek in het hart voorkomen (volgens mij LDH1 en -2). Na een isolatie is een activiteitsbepaling echter niet zo interessant, omdat je de in vitro activiteit meet en niet de in vivo activiteit.

Als het je dus puur te doen is om de LDH activiteit zoals die in het levende hart geweest is, kun je het beste simpelweg de pH bepalen, met een paar goede controle metingen erbij (LDH is betrokken bij de anaerobe verbranding), of je kan een lysaat maken van de hartcellen en hierin een lactaat-bepaling doen.

Het is voor mij allemaal wat oude stof, dus de details weet ik niet meer. Maar, als je de formule die je noemt in acht neemt en de standaardwaarden voor de betrokken stoffen opzoekt, hoef je ze alleen maar na te meten. Puur voor de activiteit is een pH meting denk ik het makkelijkste...

groet
Omhoog

Bericht 10-09-'05, 16:22

sdekivit

Berichten: 704

Re: LDH isolatie, activiteit en gehalte

LDH-activiteit is prima te meten middels een spectrometrische bepaling (colorimetrie). Je moet dan inderdaad een lysaat maken en dan bij verschillende aantallen rotaties per minuut de kernen, mito's enz eruit vissen. Hiermee is ook goed te bepalen waar in de cel LDH actief is.
Omhoog
Reageer

Terug naar “Biologie en medisch laboratoriumonderzoek”