Springen naar inhoud

Verkrijgen en zuiveren van een eiwit


  • Log in om te kunnen reageren

#1

timmert26

    timmert26


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 03 september 2011 - 10:34

Wij moeten voor school een eiwit verkrijgen uit goedkoop uitgangsmateriaal, bijvoorbeeld LDH uit kalfslever. Vervolgens moeten wij dit eiwit zo zuiver mogelijk maken op een manier dat het lang houdbaar is. Ik heb al een beetje rondgezocht maar hier is moeilijk wat over te vinden. Heeft iemand wat ideeŽn die mij de goede richting in zouden kunnen sturen?

b.v.d Tim

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Mrtn

    Mrtn


  • >1k berichten
  • 4220 berichten
  • VIP

Geplaatst op 03 september 2011 - 10:49

Dialyse kan je overwegen. En een beetje natrium azide erbij voor de opslag..
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-

#3

timmert26

    timmert26


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 03 september 2011 - 10:59

ben 2e jaars, maar snap niet echt wat je bedoelt. Dialyse is toch voor de nieren? Welke eiwitten zou je hiermee kunnen verkrijgen en welke "grondstoffen" heb je hiervoor nodig?

bedankt ;)

#4

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8252 berichten
  • VIP

Geplaatst op 03 september 2011 - 13:09

2de jaars wat?

Het kan handig zijn om te vermelden wat je kennis niveau is, dan kunnen we specifieke reacties daaraan aanpassen indien nodig.

dialyse is een oude bekende laboratorium techniek. Hierbij gebruikt men een soort zak met hele kleine gaatjes erin. Vul deze zak vervolgens met je begin oplossing en hang 'm in een grote bak. Door diffusie zullen eiwitten die hier in zitten zich over de inhoud van de grote bak verdelen, behalve die niet door de kleine gaatjes kunnen.

Het kiezen van een eiwit wat je wilt zuiveren kan lastig zijn afhankelijk van de scheidingstechnieken die je tot je beschikking hebt en de vallidatie dat je ook daadwerkelijk je eiwit hebt gezuiverd.

Zonder hier meer over te weten gaat het lastig worden om je te adviseren. In principe kan je elk eiwit wel scheiden, het is fijn als je een eiwit bron hebt die veel voorradig is en relatief goedkoop is, als deze dan ook nog eens vloeibaar is, dan heb je een heel goed begin. Denk hierbij bijvoorbeeld aan caseine wat veel in melk te vinden is. Als men wrongel maakt uit melk in de eerste stadia van kaasproductie doet men niet anders dan eiwitten uit de melk halen.
"Meep meep meep." Beaker

#5

timmert26

    timmert26


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 03 september 2011 - 15:45

2e jaars HBO biologie en medisch laboratoriumonderzoek. We hebben een lab met een centrifuges, spectrofotometers en allerlei andere materialen. Qua materialen is er ook een beste lijst op voorraad. Het detecteren moet vooral gebeuren adv een spectrofotometer.

We hebben de tip gekregen te zoeken naar dit soort eiwitten.
Peroxidase (met name HRP), AF uit diverse uitgangsmaterialen, beta-galactosidase, LDH, ADH, MDH, trypsinogeen/trypsine

bedankt voor je reactie

#6

Wouter_Masselink

    Wouter_Masselink


  • >5k berichten
  • 8252 berichten
  • VIP

Geplaatst op 04 september 2011 - 15:49

aah dat is al veel meer duidelijkheid. Zo kunnen we allemaal een goede inschatting maken van wat je kent en kunt.

Ik had eigenlijk wel een beetje verwacht dat je bekend zou zijn met dialyse, hoe dan ook... Er zijn een aantal principes die je kan gebruiken om een eiwit te zuiveren. Je zou bijvoorbeeld een zuivering op grootte kunnen doen (door middel van kolommen of dialyse of SDS-page). Verder kan je kijken naar het iso-electrisch punt (wederom kolommen maar ook 2D page) en het gewicht van een eiwit (ultra-centrifuge)

Als je een eiwit kiest dat de extremen van de sprectra opzoekt dan is dit eiwit relatief makkelijk te isoleren aangezien de meeste eiwitten een verschil in IEP, formaat en gewicht hebben.

Je zal een kwantitatieve isolatie uit willen voeren. Eerst zal je je bronmateriaal moeten lyseren, dat kan met een organisch solvent, enzymatisch of mechanisch. De keuze zal afhankelijk zijn van je bronmateriaal en het eiwit dat je wilt isoleren, natuurlijk spelen praktische factoren (of je het apparaat hebt) ook een rol.

Als je je eiwitbrei voldoende hebt gehomogeniseerd dan volgt de stap om de meeste andere eiwitten te verwijderen. Ik zou beginnen met het scheiden van m'n eiwitten aan de hand van een precipitatie (amonium sulfaat toevoegen). Verschillende fracties kan je hiermee isoleren afhankelijk van de oplosbaarheid van de eiwitten in kwestie. Dit kan je in een kort practicum doen. Je volgende stap zou een dialyse zijn om je ammonium sulfaat kwijt te raken en ook meteen andere kleinere eiwitten en andere stoffen te verwijderen. Doe dit overnacht en herhaal 2-3 keer.

Een SEC (size exclusion chromatography) of een HIC (hydrophobic Interaction Chromatography) is een logische volgende stap maar zal wederom afhankelijk zijn van de aard van het eiwit waar je achteraan zit.

De belangrijkste tip blijft dan ook, kies een eiwit met een of meerdere unieke kenmerken waardoor je het relatief eenvoudig van andere eiwitten kan scheiden. Een andere tip, begin met meer start materiaal en houdt altijd een gedeelte van je vorige stap achter de hand. Zodoende, als er iets verkeerd gaat hoef je niet helemaal weer opnieuw te beginnen maar hoef je maar 1 stap terug te gaan. Succes!
"Meep meep meep." Beaker





1 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 1 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures