Springen naar inhoud

Immunofluorescentie


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Dreampje

    Dreampje


  • 0 - 25 berichten
  • 14 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 06 november 2011 - 15:47

Hallo,

Wij hebben een paar dagen geleden een proef gedaan met immunofluorescentie.
Na afloop hiervan kregen wij een aantal vragen die we thuis moesten beantwoorden.
Ik ben al een hele tijd bezig om de volgende vragen te beantwoorden, maar ik heb echt geen flauw idee:
Zie je in de HELA cellen de tubuline aangekleurd? Geef het verschil aan met het aangekleurde fibronectine en leg uit wat dit betekend.
Je hebt zojuist onderzocht wat het verschil is tussen de cellen van een gezond en van een ziek persoon. Wat is je conclusie uit dit experiment?

Dit was de proef:
- Was het dekglaasje met gefixeerde tumorcellen door 1 ŕ 2 mL PBS/tween-buffer in het schaaltje te pipetteren met een pasteur pipet. Zwenk 10 seconden en verwijder de vloeistof met hetzelfde pipet. Hierbij kun je het petrischaaltje licht schuin houden.
- Verspreid 100 μl antistof (AB; FITC-geconjugeerd anti-tubuline) over de cellen op het dekglaasje.
- Dek je petrischaaltje af met aluminiumfolie en incubeer minstens 15 minuten in het donker bij kamertemperatuur.
- Haal je dekglaasje uit het donker en was het 3x met de PBS/tween-buffer door 1 ŕ 2 mL PBS/tween-buffer in het schaaltje te pipetteren met een pasteur pipet. Zwenk 10 seconden en verwijder de vloeistof met hetzelfde pipet. Hierbij kan je het petrischaaltje licht schuin houden. Zorg ervoor dat het dekglaasje niet kan opdrogen.
- Verspreid 100 μl propidium-jodide (PI) over de cellen op het dekglaasje en laat dit maximaal(!) 30 seconden in het donker incuberen.
- Haal je dekglaasje weer uit het donker en was het nu niet 1x, maar 3x met PBS/tween-buffer.
- Bekijk het objectglaasje met de gefixeerde kankercellen samen met een van de assistenten onder de fluorescentiemicroscoop bij een vergroting van 1000x. Teken hoe de cellen er nu uitzien.

Ik hoop dat iemand me kan helpen!

Veranderd door Dreampje, 06 november 2011 - 15:50


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Kravitz

    Kravitz


  • >1k berichten
  • 4042 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 06 november 2011 - 19:10

Kan je dit iets meer in zijn context plaatsen? Nu stel je enkele losse vragen met daaronder een beschrijving van een experiment. Wat heb je tijdens dit practicum gezien? Waar lagen de verschillen en wat heb je zelf al bedacht?
"Success is the ability to go from one failure to another with no loss of enthusiasm" - Winston Churchill

#3

Dreampje

    Dreampje


  • 0 - 25 berichten
  • 14 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 06 november 2011 - 19:45

Dit is 'het boekje' waar de proef wat uitgebreider beschreven staat
http://www.allesover..._ziek_Basis.pdf

Dit is de enige vraag die ik nog moet beantwoorden, de andere heb ik inmiddels beantwoord:
Zie je in de HELA cellen de tubuline aangekleurd? Geef het verschil aan met het aangekleurde fibronectine en leg uit wat dit betekend.

Tijdens het experiment hebben wij helemaal geen fibronectine moeten gebruiken voor zover ik weet.
Dit is ook het geen dat ik niet kan plaatsen.
Door het tubuline kon je de HELA cellen onder de fluorescentiemicroscoop groen waarnemen.

Veranderd door Dreampje, 06 november 2011 - 19:52






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures