Springen naar inhoud

[biochemie] functie componenten lysebuffer


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Sjitty

    Sjitty


  • >250 berichten
  • 320 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 december 2011 - 10:59

Iemand op de hoogte van de functie van volgende componenten uit een lysebuffer:

Tris-fosfaat pH 7,8: buffer; nog ander functies?
Diaminocyclohexanetetraacetic acid (DCTA): geen enkel idee
Dithiothreitol (DTT): reducerend agens maar waarvoor? disulfidebruggen breken? maar waarom?
Glycerol (cryo-protectie???)

De lysebuffer word gebruikt om HEK293T reporter cellen te lyseren voor een luciferase assay.

Mvg

Veranderd door Sjitty, 01 december 2011 - 11:00


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Mrtn

    Mrtn


  • >1k berichten
  • 4220 berichten
  • VIP

Geplaatst op 01 december 2011 - 14:17

- Tris is inderdaad gewoon een pH-buffer, c'est tout
- DCTA is een stof die op EDTA lijkt
- Dit luciferase assay doe je om transcriptional strength te bepalen? DTT verpest de vouwing van eiwitten......
Verborgen inhoud
denk: enzymen die dingen kapot maken

- Glycerol ..geen idee waarom je dat erbij zou doen
Cryo-protectie doe je juist voor intacte cellen, voor lysaat is het minder belangrijk.

Veranderd door Mrtn, 01 december 2011 - 14:18

Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-

#3

Sjitty

    Sjitty


  • >250 berichten
  • 320 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 december 2011 - 13:20

DCTA dan wss om de cellen los te maken van de plaat?
de pH van de buffer ligt iets hoger dan de fysiologische pH, heeft dat een reden?

De HEK293T cellen werden getransfecteerd met een plasmide coderend voor Luciferase met een promotor gereguleerd door een nucleaire receptor. Het is de bedoeling om een synthetisch ligand van de nucleaire receptor te kwantificeren adhv de hoeveelheid geëxpresserd luciferase.

Daarom vond ik het dus vreemd dat de lysebuffer idd stoffen bevat die eiwitten zouden denatureren gezien luciferase toch wel functioneel moet blijven voor de luciferase assay.

De lysaten werden telkens overnacht bewaard bij -20°C. Heeft glycerol dan geen functie om luciferase te beschermen bij lage temperatuur? Glycerol is toch toxisch voor cellen?





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures