Iemand op de hoogte van de functie van volgende componenten uit een lysebuffer:
Tris-fosfaat pH 7,8: buffer; nog ander functies?
Diaminocyclohexanetetraacetic acid (DCTA): geen enkel idee
Dithiothreitol (DTT): reducerend agens maar waarvoor? disulfidebruggen breken? maar waarom?
Glycerol (cryo-protectie???)
De lysebuffer word gebruikt om HEK293T reporter cellen te lyseren voor een luciferase assay.
Mvg
Laatste berichten
-
22:08
wig 11
-
21:37
speciale rel. theorie 12
-
21:22
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 11
-
20:14
Aardlek-schakelaar 2
-
15:56
Programmeren met vectoren 6
-
14:53
Straatklok loopt 5 minuten voor 12
-
25 apr
Gravity and gravitation 4
-
25 apr
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
25 apr
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
25 apr
Rood laserlicht 3
-
25 apr
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
25 apr
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
25 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
25 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
25 apr
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
25 apr
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
[biochemie] functie componenten lysebuffer
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 4.220
Re: [biochemie] functie componenten lysebuffer
- Tris is inderdaad gewoon een pH-buffer, c'est tout
- DCTA is een stof die op EDTA lijkt
- Dit luciferase assay doe je om transcriptional strength te bepalen? DTT verpest de vouwing van eiwitten......
- Glycerol ..geen idee waarom je dat erbij zou doen
Cryo-protectie doe je juist voor intacte cellen, voor lysaat is het minder belangrijk.
- DCTA is een stof die op EDTA lijkt
- Dit luciferase assay doe je om transcriptional strength te bepalen? DTT verpest de vouwing van eiwitten......
Verborgen inhoud
- Glycerol ..geen idee waarom je dat erbij zou doen
Cryo-protectie doe je juist voor intacte cellen, voor lysaat is het minder belangrijk.
Of course, the theory of relativity only works if you're going west.
-Calvin-
-Calvin-
-
- Berichten: 320
Re: [biochemie] functie componenten lysebuffer
DCTA dan wss om de cellen los te maken van de plaat?
de pH van de buffer ligt iets hoger dan de fysiologische pH, heeft dat een reden?
De HEK293T cellen werden getransfecteerd met een plasmide coderend voor Luciferase met een promotor gereguleerd door een nucleaire receptor. Het is de bedoeling om een synthetisch ligand van de nucleaire receptor te kwantificeren adhv de hoeveelheid geëxpresserd luciferase.
Daarom vond ik het dus vreemd dat de lysebuffer idd stoffen bevat die eiwitten zouden denatureren gezien luciferase toch wel functioneel moet blijven voor de luciferase assay.
De lysaten werden telkens overnacht bewaard bij -20°C. Heeft glycerol dan geen functie om luciferase te beschermen bij lage temperatuur? Glycerol is toch toxisch voor cellen?
de pH van de buffer ligt iets hoger dan de fysiologische pH, heeft dat een reden?
De HEK293T cellen werden getransfecteerd met een plasmide coderend voor Luciferase met een promotor gereguleerd door een nucleaire receptor. Het is de bedoeling om een synthetisch ligand van de nucleaire receptor te kwantificeren adhv de hoeveelheid geëxpresserd luciferase.
Daarom vond ik het dus vreemd dat de lysebuffer idd stoffen bevat die eiwitten zouden denatureren gezien luciferase toch wel functioneel moet blijven voor de luciferase assay.
De lysaten werden telkens overnacht bewaard bij -20°C. Heeft glycerol dan geen functie om luciferase te beschermen bij lage temperatuur? Glycerol is toch toxisch voor cellen?
