Springen naar inhoud

ABTS kleur reagens.


  • Log in om te kunnen reageren

#1

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 23 maart 2004 - 12:31

Goedendag,
Ik ben momenteel spectrofotometrisch bezig met een chloor gehalte bepaling met als kleurreagens ABTS. Voorschrift gehaald van het internet. Maar nu het probleem . Ik werk met monster met een lage zuurtgraad (2,25) dus ik moet het monster behoorlijk bufferen. Volgens het voorschrift is het monster stabiel gekleurd bij een ph van 6,1. Ik heb een aantal testen gedaan met het volgende resultaat. Bij een ph lager als 6 ontkleurt de kleurreagens en met een ph boven de 7 treedt er ook ontkleuring op. Maar bij een ph van 6,1 gaat de ontkleuring heel langzaam maar het is er wel weet iemand de exacte ph voor een ABTS kleurreagens? [!] ik ga morgen testen met verschillende buffers (fosfaat) namelijk 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 kijken welke buffer het stabielste is. Molariteit is 0.5 M. 3 ml in een oplossing van 25 ml.

MvG Ron :D

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Jorim

    Jorim


  • >5k berichten
  • 5075 berichten
  • Beheer

Geplaatst op 23 maart 2004 - 13:06

Geplaatste afbeelding

Optimal enzymatic activity was found at pH 3.0 and at pH 7.0 for ABTS or SGZ oxidation, respectively. The apparent Km values for ABTS and SGZ at 37 C were of 106 11 and 26 2 M, respectively, with corresponding kcat values of 16.8 0.8 and 3.7 0.1 s1. Maximal enzyme activity was observed at 75 C with ABTS as substrate. Remarkably, the coat-associated or the purified enzyme showed a half-life of inactivation at 80 C of about 4 and 2 h, respectively, indicating that CotA is intrinsically highly thermostable.
Bron: J. Biol. Chem., Vol. 277, Issue 21, 18849-18859, May 24, 2002

#3

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 23 maart 2004 - 13:58

ja klopt dit wordt gebruikt voor enzymkinitiek maar ik heb een voorschrift voor chloor en daarin moet er een stabiele kleuring zijn voor een gehalte bepaling dus heb ik hier niet zoveel aan. :D Maar bedankt voor het helpen zoeken naar gegevens. 8-)

MvG Ron

#4

Jorim

    Jorim


  • >5k berichten
  • 5075 berichten
  • Beheer

Geplaatst op 23 maart 2004 - 14:45

Mijn artikeltje was inderdaad alleen maar enzymatische blabla en daar heb je niks aan...
Even verder gezocht en heb nu een chloordeterminatie met ABTS (waarschijnlijk dezelfde als die jij gebruikt, te zien aan de gegevens) waarbij ze een fosfaatbuffer gebruiken van pH 6,1 maar door mengen en verdunnen een 'stabiel' monster hebben met pH 6,5. Dit gekleurde ABTS molecuultje heeft een halfwaardetijd van ongeveer 47 uur, dus kan je zeggen dat het dus heel goed te meten is!
Bron: Fotometrische bepaling van broom en chloor met ABTS

Ik hoop dat je HIER nu wel wat aan hebt :D

#5

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 23 maart 2004 - 17:01

ja daar heb ik wel wat aan inderdaad moet een stabiel mengsel worden. Ik denk dat ik een ph van buffer op moet voeren want als ik alles meng met een buffer van 6.1 dan is mijn monster 6.0 ik heb een aangezuurd monster dus moet buffer opvoeren tot 6.5 a 6.6 gok ik dan moet ik het volgens mij wel willen. 8-)

Bedankt
MvG Ron :D

#6

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 25 maart 2004 - 10:08

Het werkt!!!! :D
ik heb mijn aangezuurde monsters gemengd met een fosfaatbuffer van 6,5 van 0,5 M. Het blijkt dat mijn buffer sterk genoeg is om precies op 6.5 te blijven en 6.5 is de ideale ph voor het kleurreagens. Mijn reagens bleef dus stabiel en ik kon goede metingen uitvoeren. Tevens kwam ik er achter dat er behoorlijk veel chloor in mijn monster zit dat ik het sterk moest verdunnen om het reagens stabiel te houden. een verdunning van 1 op 20. Maar ik heb nu gegevens die ik aan het bedrijf kan voor leggen waar ze iets mee kunnen.

MvG Ron

#7

Jorim

    Jorim


  • >5k berichten
  • 5075 berichten
  • Beheer

Geplaatst op 25 maart 2004 - 11:02

Fijn dat ik daarmee heb kunnen helpen :D





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures