Springen naar inhoud

lactaatdehrogenase zuiveren uit kipfilet


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Gulistan

    Gulistan


  • 0 - 25 berichten
  • 3 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 oktober 2004 - 22:53

wie kan mij helpen met het zoeken over methodes hoe ik ldh kan zuiveren uit kipfilet. of heeft er een van jullie misschien al info over dit onderwerp??????????

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 oktober 2004 - 08:58

Beste Gulistan, welkom op Chemieforum.nl!

Na het homogeneren en fractioneren van het weefsel in ijskoude buffer kan tot scheiden worden overgegaan. Een goede methode om LDH te zuiveren is met kolomchromatografie, te weten: GPC (gelpermeatie chromatografie: scheiding op grootte), affiniteitschromatografie (met een gelinkt substraat aan de matrix), of IEC (ion exchange chromatografie). Ook goede zuiveringsmethodes zijn met ammoniumsulfaat waardoor denaturatie van andere eiwitten plaatsvind en deze precipiteren (neerslaan). Elk eiwit slaat namelijk bij een karakteristieke concentratie van ammoniumsulfaat neer.

De ervaring leert dat de combinatie van technieken de beste resultaten oplevert, maar natuurlijk ook het meeste tijd kost. Gewoonweg worden de exclusiestappen met ammoniumsulfaat als eerste uitgevoerd omdat je hiermee de grootste hoeveelheid aan overbodige eiwitten dumpt. Hierna zou gelpermatie een logische stap zijn, gevolg door ion exchange. Uiteindelijk kan affiniteitschromatografie gebruikt worden om het zo LDH zuiver mogelijk te krijgen. Vanwege de lage kolomcapaciteit en aanwezigheid van andere enzymen die hetzelfde substraat hebben (vaak gebruik als een NAD+ lookalike gelinkt aan de matrix: AMP-agarose) is het niet aan te raden deze techniek gelijk op je homogenaat los te laten. Laat even weten WAT voor zuivering je precies wilt uitvoeren, want het is niet echt handig om alle technieken uitvoerig toe te lichten.

Ik heb je onderwerp even verplaats naar de sectie scheidingsmethoden, zoals je ziet

#3

UMBRELLA

    UMBRELLA


  • >25 berichten
  • 38 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 22 december 2004 - 15:35

He, dezelfde opdracht hebben wij ook van school gekregen. Alleen moeten wij LDH-1 uit runderhart zuiveren.

Mijn interesse gaat voornamelijk uit naar het ontzouten met ammoniumsulfaat, het zuiveren met behulp van ionchromatografie. Gelchromatografie zou ook een zeer welkome aanvulling zijn.

Ik hoop dat jullie me kunnen helpen en dat het niet teveel moeite is.. In ieder geval alvast bedankt!





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures