Springen naar inhoud

preperatieve HPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

tripping20

    tripping20


  • 0 - 25 berichten
  • 21 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2004 - 09:30

Ik wil een onzuiverheid in een medicijn bepalen dmv preperatieve HPLC.

Om daartoe te komen wil ik eerst mbv TLC de optimale eluens bepalen.

En dan verder? Ik zou niet echt weten wat ik daarna zou moeten doen.

Graag tips

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Tom_CF

    Tom_CF


  • >100 berichten
  • 159 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2004 - 11:16

Als je het optimale eluens bepaald hebt, kun je al met de HPLC-scheiding beginnen. Ik zou dan beginnen met een testloop, waarbij je nog niets afscheidt, maar alleen de stof door de kolom pompt om te kijken hoe het spectrum eruit ziet en bij welke retentietijd iets voorbij komt. Aan de hand daarvan kun je ook de pompsnelheid aanpassen. Je moet er natuurlijk wel op letten dat je bij de TLC en de HPLC dezelfde stationaire fase hebt. Ik neem aan dat je weet hoe een preparatieve HPLC werkt.

#3

tripping20

    tripping20


  • 0 - 25 berichten
  • 21 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2004 - 12:36

Nou daar zou ik best wel wat hulp bij kunnen gebruiken.

Alvast bedankt

#4

chemboy_CF

    chemboy_CF


  • >25 berichten
  • 31 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2004 - 16:08

Persoonlijk zou ik de volgende strategie toepassen: ontwikkel eerst op een normale analytische kolom een systeem dat voldoende scheidend is (zonder gebruik te maken van buffers, deze geven zout bij het indampen van het preparatieve monster. Evt. mierenzuur gebruiken om eluens aan te zuren; dit verdampt). Bij voorkeur een isocratisch systeem gebruiken, dat scheelt aanzienlijk in prep-tijd op de grote kolom.
Vervolgens neem je een vergelijkbare prep.HPLC kolom (dus bijv. een RP-18 als je deze ook als analytische kolom hebt gebruikt) met hetzelfde eluens systeem als de analytische kolom en prik je je monster. Je vangt fracties op en kijkt met het analytische systeem of ze voldoende zuiver zijn (of je dus voldoende scheidend vermogen hebt). Als dat zo is kun je gaan "preppen‚ÄĚ.

Maar waarom probeer je niet eens LC-MS? Veel sneller en kan ook al goede aanwijzingen geven wat het bijproduct is.
Of probeer je analytisch systeem semi-preparatief te gebruiken. De meeste analytische kolommen kun je behoorlijk overladen. Je kunt dan in ieder geval een monster van het bijproduct opvangen voor MS.

Succes ermee.

#5

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2004 - 16:11

LC/MS is misschien in dit geval wel sneller maar niet iedereen zal beschikken over een (dure) grote ingewikkelde MS. En sommige proberen juist net een detectie methode op te stellen voor niet MS toepassingen....MS houdt niet van zout etc.

Maar jou aanpak (chemboy) voor de prep LC ook watik zou aanbevelen!

Veranderd door JeroenC, 18 november 2004 - 16:11


#6

tripping20

    tripping20


  • 0 - 25 berichten
  • 21 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 november 2004 - 16:27

1) Sorry voor de dubbelpost. Dat was niet de bedoeling. Ik was vergeten de emailmelding in te schakelen

2) LC-MS is aanwezig en het is de bedoeling dat ik ook daarop ga werken.

3) De methode voor de HPLC krijg ik. Deze methode heb ik aangepast voor de LC-DAD-UV/VIS. Het probleem is dat ik te weinig van de onzuivere stof kan opvangen, waardoor ik wel moet "preppen".

4) Aan semipreperatief had ik nog niet gedacht.


Alvast bedankt voor de tips (en voor de komende tips)

Veranderd door tripping20, 18 november 2004 - 16:29


#7

Ionize

    Ionize


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 december 2004 - 23:42

1) Sorry voor de dubbelpost. Dat was niet de bedoeling. Ik was vergeten de emailmelding in te schakelen

2) LC-MS is aanwezig en het is de bedoeling dat ik ook daarop ga werken.

3) De methode voor de HPLC krijg ik. Deze methode heb ik aangepast voor de LC-DAD-UV/VIS. Het probleem is dat ik te weinig van de onzuivere stof kan opvangen, waardoor ik wel moet "preppen".

4) Aan semipreperatief had ik nog niet gedacht.


Alvast bedankt voor de tips (en voor de komende tips)

als je over een volledig geautomatiseerd systeem beschikt (wat ik aanneem anders heb je er geen DAD in zitten) kun je toch over een weekend een groot aantal maal je kleine onzuivere stof prikken? De onzuivere fractie lijkt me dan toch wel groot genoeg worden om verder mee te kunnen werken, desnoods gebruik makend van een fractieverzamelaar met samplekoeling afhankelijk van je methode.

#8

tripping20

    tripping20


  • 0 - 25 berichten
  • 21 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 december 2004 - 19:22

bedankt voor de tip :D





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures