Ik wil een onzuiverheid in een medicijn bepalen dmv preperatieve HPLC.
Om daartoe te komen wil ik eerst mbv TLC de optimale eluens bepalen.
En dan verder? Ik zou niet echt weten wat ik daarna zou moeten doen.
Graag tips
Laatste berichten
-
22:08
wig 11
-
21:37
speciale rel. theorie 12
-
21:22
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 11
-
20:14
Aardlek-schakelaar 2
-
15:56
Programmeren met vectoren 6
-
14:53
Straatklok loopt 5 minuten voor 12
-
25 apr
Gravity and gravitation 4
-
25 apr
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
25 apr
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
25 apr
Rood laserlicht 3
-
25 apr
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
25 apr
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
25 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
25 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
25 apr
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
25 apr
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
preperatieve HPLC
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 159
Re: preperatieve HPLC
Als je het optimale eluens bepaald hebt, kun je al met de HPLC-scheiding beginnen. Ik zou dan beginnen met een testloop, waarbij je nog niets afscheidt, maar alleen de stof door de kolom pompt om te kijken hoe het spectrum eruit ziet en bij welke retentietijd iets voorbij komt. Aan de hand daarvan kun je ook de pompsnelheid aanpassen. Je moet er natuurlijk wel op letten dat je bij de TLC en de HPLC dezelfde stationaire fase hebt. Ik neem aan dat je weet hoe een preparatieve HPLC werkt.
-
- Berichten: 21
Re: preperatieve HPLC
Nou daar zou ik best wel wat hulp bij kunnen gebruiken.
Alvast bedankt
Alvast bedankt
-
- Berichten: 31
Re: preperatieve HPLC
Persoonlijk zou ik de volgende strategie toepassen: ontwikkel eerst op een normale analytische kolom een systeem dat voldoende scheidend is (zonder gebruik te maken van buffers, deze geven zout bij het indampen van het preparatieve monster. Evt. mierenzuur gebruiken om eluens aan te zuren; dit verdampt). Bij voorkeur een isocratisch systeem gebruiken, dat scheelt aanzienlijk in prep-tijd op de grote kolom.
Vervolgens neem je een vergelijkbare prep.HPLC kolom (dus bijv. een RP-18 als je deze ook als analytische kolom hebt gebruikt) met hetzelfde eluens systeem als de analytische kolom en prik je je monster. Je vangt fracties op en kijkt met het analytische systeem of ze voldoende zuiver zijn (of je dus voldoende scheidend vermogen hebt). Als dat zo is kun je gaan "preppenâ.
Maar waarom probeer je niet eens LC-MS? Veel sneller en kan ook al goede aanwijzingen geven wat het bijproduct is.
Of probeer je analytisch systeem semi-preparatief te gebruiken. De meeste analytische kolommen kun je behoorlijk overladen. Je kunt dan in ieder geval een monster van het bijproduct opvangen voor MS.
Succes ermee.
Vervolgens neem je een vergelijkbare prep.HPLC kolom (dus bijv. een RP-18 als je deze ook als analytische kolom hebt gebruikt) met hetzelfde eluens systeem als de analytische kolom en prik je je monster. Je vangt fracties op en kijkt met het analytische systeem of ze voldoende zuiver zijn (of je dus voldoende scheidend vermogen hebt). Als dat zo is kun je gaan "preppenâ.
Maar waarom probeer je niet eens LC-MS? Veel sneller en kan ook al goede aanwijzingen geven wat het bijproduct is.
Of probeer je analytisch systeem semi-preparatief te gebruiken. De meeste analytische kolommen kun je behoorlijk overladen. Je kunt dan in ieder geval een monster van het bijproduct opvangen voor MS.
Succes ermee.
-
- Berichten: 1.153
Re: preperatieve HPLC
LC/MS is misschien in dit geval wel sneller maar niet iedereen zal beschikken over een (dure) grote ingewikkelde MS. En sommige proberen juist net een detectie methode op te stellen voor niet MS toepassingen....MS houdt niet van zout etc.
Maar jou aanpak (chemboy) voor de prep LC ook watik zou aanbevelen!
Maar jou aanpak (chemboy) voor de prep LC ook watik zou aanbevelen!
-
- Berichten: 21
Re: preperatieve HPLC
1) Sorry voor de dubbelpost. Dat was niet de bedoeling. Ik was vergeten de emailmelding in te schakelen
2) LC-MS is aanwezig en het is de bedoeling dat ik ook daarop ga werken.
3) De methode voor de HPLC krijg ik. Deze methode heb ik aangepast voor de LC-DAD-UV/VIS. Het probleem is dat ik te weinig van de onzuivere stof kan opvangen, waardoor ik wel moet "preppen".
4) Aan semipreperatief had ik nog niet gedacht.
Alvast bedankt voor de tips (en voor de komende tips)
2) LC-MS is aanwezig en het is de bedoeling dat ik ook daarop ga werken.
3) De methode voor de HPLC krijg ik. Deze methode heb ik aangepast voor de LC-DAD-UV/VIS. Het probleem is dat ik te weinig van de onzuivere stof kan opvangen, waardoor ik wel moet "preppen".
4) Aan semipreperatief had ik nog niet gedacht.
Alvast bedankt voor de tips (en voor de komende tips)
-
- Berichten: 4
Re: preperatieve HPLC
als je over een volledig geautomatiseerd systeem beschikt (wat ik aanneem anders heb je er geen DAD in zitten) kun je toch over een weekend een groot aantal maal je kleine onzuivere stof prikken? De onzuivere fractie lijkt me dan toch wel groot genoeg worden om verder mee te kunnen werken, desnoods gebruik makend van een fractieverzamelaar met samplekoeling afhankelijk van je methode.tripping20 schreef: 1) Sorry voor de dubbelpost. Dat was niet de bedoeling. Ik was vergeten de emailmelding in te schakelen
2) LC-MS is aanwezig en het is de bedoeling dat ik ook daarop ga werken.
3) De methode voor de HPLC krijg ik. Deze methode heb ik aangepast voor de LC-DAD-UV/VIS. Het probleem is dat ik te weinig van de onzuivere stof kan opvangen, waardoor ik wel moet "preppen".
4) Aan semipreperatief had ik nog niet gedacht.
Alvast bedankt voor de tips (en voor de komende tips)
