Springen naar inhoud

Eiwitbepaling sprinkhanen


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Grasshopper_CF

    Grasshopper_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 januari 2005 - 16:52

Beste lui,

wij willen toetsen of sprinkhanen wel/niet als vleesvervanger kunnen dienen. Hiervoor willen wij het eiwitgehalte in sprinkhanen bepalen. Nu hebben wij gehoord over ene Dumas en Kjehldahl methode. Aangezien wij (en onze begeleiders) hier niet bekend mee zijn, zouden wij gaarne wat informatie krijgen middels dit forum. Wij hebben begrepen dat beide methodes berusten op een indicatie van de eiwitconcentratie aan de hand van de stikstofconcentratie.


Gaarne specifieke informatie en geen jargon; een duidelijke proefbeschrijving hebben wij zelf nog niet kunnen vinden. Ook willen wij graag weten wat de verschillen tussen beide methodes zijn en aan welke jullie de voorkeur zouden geven.

Dank bij voorbaat voor alle informatie.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Jurn

    Jurn


  • >250 berichten
  • 851 berichten
  • VIP

Geplaatst op 26 januari 2005 - 18:29

Google al geprobeerd :D


Beryllium: een linkje erbij geven dan is wel handig! Of kon je zelf ook niets vinden op Google? :P

Veranderd door Beryllium, 26 januari 2005 - 21:52

Jurn [WSF - Technicus]

It is better to be silent and be thought a fool, than to speak and remove all doubt -- Abraham Lincoln
Duct tape is like the force. It has a light side, a dark side, and it holds the universe together.... - Carl Zwanzig

#3

opajuup

    opajuup


  • >100 berichten
  • 204 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 januari 2005 - 19:25

Heb even zitten zoeken, misschien heb je hier iets aan:
http://www.njfl.com/...ein_method1.htm

Groetjes van een oude rot in het vak. :D

#4

Grasshopper_CF

    Grasshopper_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 27 januari 2005 - 11:10

jurn, aan dergelijke reacties hebben wij natuurlijk niets. Wellicht kan je beter niets posten als er niets zinnigs uitkomt. Uiteraard hebben wij google al geprobeerd maar helaas konden wij daar niets concreets vinden.

@opajuup, helaas was het niet precies wat wij zochten, toch bedankt voor je reactie! :D

Wij zoeken dus een proefbeschrijving van eiwitbepaling van sprinkhanen(of andere insecten), of dat de DUMAS of Kjehldahl methode moet worden is nog de vraag....

#5

cheMister

    cheMister


  • >250 berichten
  • 266 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 27 januari 2005 - 11:41

Deze methodes dien om het organisch stikstofgehalte te bepalen en aangezien stikstof in aminozuren en dus ook proteinen zit kan het gehalte dus afgeleid worden. De Kjeldahl methode is gebaseerd op een neutralisatie titratie.
Omdat de meeste proteinen het ongeveer hetzelfde percentage stikstof hebben bepaalt het percentage vermenigvuldigt met 6.25 (voor vlees) het totaal percentage proteine in het staal.

De Kjeldahlmethode is de standaardmethode voor eiwitbepaling in voeding.

Voor verdere informatie raad ik Fundamentals of analytical chemistry (Skoog isbn 0-03-035523-0) waar een beschrijving (zonder concrete volumes) van de methodes in beschreven staat.

#6

Jorim

    Jorim


  • >5k berichten
  • 5075 berichten
  • Beheer

Geplaatst op 27 januari 2005 - 11:57

Kjeldahl is inderdaad dť methode om dit (simpel) te doen, nog geen behoefte aan een compleet boek, kijk dan even op de site van biochemiefreak en dan met name naar dit documentje!

#7

michiel11_CF

    michiel11_CF


  • >25 berichten
  • 27 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 27 januari 2005 - 23:24

Een andere (nog veel simpelere :D ?) methode is met de Lowry-test (volgens mij is dit de officiele naam).
Eiwit reageert met Folin-ciocalteau reagens tot een gekleerd (ik geloof roodachtig) complex. Voor deze kleur zijn twee reacties verandwoordelijk:
in de eerste plaats reageerd het eiwit met basische aminozure tyrosine en tryptofaan in het eiwit fosformolybdaat reduceren.
De kleurintensiteit is afhankelijk van de hoeveelheid tyrosine en tryptofaan in het eiwit.
Deze kleur intensiteit kan je dan weer meten met een spectofotometer.

Ik hoop dat je hier wat aan hebt, als je verder niks kan vinden over de Lowry-test kan ik je nog wel verder helpen (dan moet ik eens wat boeken uit het stof halen)

#8

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 28 januari 2005 - 08:44

Een andere (nog veel simpelere  ?) methode is met de Lowry-test (volgens mij is dit de officiele naam).
Eiwit reageert met Folin-ciocalteau reagens tot een gekleerd (ik geloof roodachtig) complex. Voor deze kleur zijn twee reacties verandwoordelijk:
in de eerste plaats reageerd het eiwit met basische aminozure tyrosine en tryptofaan in het eiwit fosformolybdaat reduceren.
De kleurintensiteit is afhankelijk van de hoeveelheid tyrosine en tryptofaan in het eiwit.
Deze kleur intensiteit kan je dan weer meten met een spectofotometer.

Ik hoop dat je hier wat aan hebt, als je verder niks kan vinden over de Lowry-test kan ik je nog wel verder helpen (dan moet ik eens wat boeken uit het stof halen)


FF wat correcties :D
Voor deze methode is een lowdy bepaling niet geschikt. Ik denk dat je te veel last krijgt van een matrix effect. Ten eerste moet je de sprinkhanen wel goed voor behandelen voor je deze bepaling kunt doen. experiment lowdy RSA standaard
Er wordt gemeten bij een golflengte van 650 nm.(blauwachtig, dus niet rood) Als controle standaard zou je BSA ook kunnen nemen. Vaak wordt een lowdy uitgevoerd in een eiwitachtige oplossing zonder veel andere producten.

Kjehdal bepaling is volgens mij beter uitvoerbaar om zoveel mogelijk achtergrond effecten weg te laten.

MvG Ron

#9

Grasshopper_CF

    Grasshopper_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 28 januari 2005 - 13:38

Dank voor alle antwoorden. Wegens de (on)beschikbaarheid van sommige apparaten die nodig zijn voor Kjeldahl en/of Dumas hebben wij besloten toch de Lowdy bepaling uit te voeren(wij hebben wel een spectrofotometer tot onze beschikking).

Nu zitten wij nog met ťťn brandende kwestie:

hoe krijgen we de (de eiwitten in) sprinkhanen in oplossing zonder daarbij de eiwitten de denatureren? Bij verhitting o.i.d. lijkt mij dat de primaire structuur v/d eiwitten verandert en dus het eiwit.
Zou het voldoende zijn om de sprinkhanen helemaal fijn te malen en vervolgens proberen op te lossen in enkel water?

#10

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 28 januari 2005 - 13:41

dat is een mogelijkheid, alleen moet je daarna nog ontzouten. De zouten uit het beestje zullen waarschijnlijk je metingen storen. Dus neem een ontzoutings kolom, NAP-5 (volgens mij is er meer beschreven op dit forum)

#11

Grasshopper_CF

    Grasshopper_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 28 januari 2005 - 19:35

Thanks...iemand anders die hier nog wat vanaf weet? Anders gaan we namelijk gewoon wat proberen, maar wat tips en/of ervaringen kan geen kwaad :D

#12

michiel11_CF

    michiel11_CF


  • >25 berichten
  • 27 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 januari 2005 - 19:27

FF wat correcties 
Voor deze methode is een lowdy bepaling niet geschikt. Ik denk dat je te veel last krijgt van een matrix effect. Ten eerste moet je de sprinkhanen wel goed voor behandelen voor je deze bepaling kunt doen. experiment lowdy RSA standaard
Er wordt gemeten bij een golflengte van 650 nm.(blauwachtig, dus niet rood) Als controle standaard zou je BSA ook kunnen nemen. Vaak wordt een lowdy uitgevoerd in een eiwitachtige oplossing zonder veel andere producten.

Kjehdal bepaling is volgens mij beter uitvoerbaar om zoveel mogelijk achtergrond effecten weg te laten.

MvG Ron


FF wat correcties (uitleg) op de correcties :D :P
Lowdy test is hetzelfde als lowry test, alleen is lowdy test de engelse benaming.
wat betreft het oplossen van de eiwitten werkt fijnhakken en dan proberen op te lossen in water denk ik het best. Gebruik een dialyse slang om storende delen weg te halen.
Wij op school voerde de bepaling uit bij 750nm en dus een roodachtige oplossing. En wij maakte een standaardlijn met een albumine oplossing (hier zal de golflengte ook wel van afhankelijk zijn (dus ook de kleur)).

Veel succes ermee

#13

Grasshopper_CF

    Grasshopper_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 5 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 januari 2005 - 20:48

Bedankt. Wij willen inderdaad een ijklijn opstellen en de eiwitten in de sprinkhanen daar inpassen. We weten alleen nog niet welke oplossing we voor de ijklijn gebruiken omdat we afhankelijk zijn van de beschikbare op te lossen eiwitten in poedervorm. Wij gaan waarschijnlijk meten bij 650nm.

Kun je nog wat meer vertellen over de 'dialyse slang'? Wat doet het precies en wat houdt het in? Het gaat er puur om een indicatie te krijgen van de hoeveelheid eiwit in sprinkhanen. Kleine afwijkingen door zouten o.i.d. maken niet veel uit. Zou het veel uitmaken wanneer wij zonder 'ontzouten' of wat dan ook de proeven gaan uitvoeren?

#14

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 01 februari 2005 - 20:48

Dialyse slang is voornamelijk geschikt om kleine moleculen te zuiveren in een buffer. Bijvoorbeeld: Je doet een eiwit product met buffer in een slang hangt deze in een PBS oplossing en de buffer wordt vervangen door de PBS. Zo krijg je eiwit opgelost in een PBS. Het eiwit heeft een grote molecuul grote en daarom blijft deze bestandsdelen in de slang. Een dialyse kan men het beste laten overnachten in een koude kamer (4 graden) in een roerende buffer en vaak is een keer verversen voldoende.

Maar je sprinkhaan moet goed opgelost zijn zodat je het eiwit er goed uit kunt zuiveren.

MvG Ron

#15

the divine one

    the divine one


  • 0 - 25 berichten
  • 21 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 16 februari 2006 - 20:46

Op welke wijze zal het verversen van de bufferoplossing het dialyseproces beÔnvloeden?





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures