Springen naar inhoud

Ammoniumsulfaatprecipitatie


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Demon van Laplace

    Demon van Laplace


  • >25 berichten
  • 98 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 februari 2005 - 10:58

Ik en mijn maat moeten een verslag schrijven over een practicum van biochemie en we kunnen een vraagje niet beantwoorden


Waarom is het belangrijk een eiwitoplossing verkregen na een ammoniumprecipitatie te dialyseren om vervolgens een anionuitwisseling uit te voeren?

Veranderd door Demon van Laplace, 19 februari 2005 - 10:59


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 19 februari 2005 - 13:43

Geef eens iets meer context. Waarom heb je die eiwitoplossing gemaakt?

#3

Demon van Laplace

    Demon van Laplace


  • >25 berichten
  • 98 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 februari 2005 - 15:30

Wel wat we gedaan hebben is het opzuiveren van het GFP-eiwit uit een E.coli bacterie. We hebben de cellen opengebroken en dan door anionuitwisselingschromatografie het GFP eiwit gescheiden van de endogene eiwitten. Daarvoor hebben we een sepharose Q kolom gebruikt waarbij de matrix bestond uit quaternaire ammoniumionen. Het gebruikte eluens had een pH = 8 en had een in de tijd toenemende NaCl concentratie. Daarna hebben we de goede fractie eruit gehaald door de fracties te bekijken onder UV licht

#4

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 19 februari 2005 - 21:30

Ik hoop dat een biochemicus je antwoord kan geven, maar ik kan een vraag stellen: kom je op deze manier af van het zout, zodat je het GFP daarna als label kunt gebruiken zonder meteen andere eiwitten te denatureren?

#5

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 20 februari 2005 - 17:41

Waarom is het belangrijk een eiwitoplossing verkregen na een ammoniumprecipitatie te dialyseren om vervolgens een anionuitwisseling uit te voeren?

Om er voor te zorgen dta je je eiwit zo zuiver mogelijk krijgt zonder dat je eiwit last krijgt van een pH wisseling. pH wisseling heeft invloed op de eiwit samenstelling. Daarom doe je een dialyse om de schadelijke effecten van de zouten en pH niveau er uit te krijgen. Voor het verder opwerken van het eiwit is het ook belangrijk om zo min mogelijk bij effecten te hebben.
Ik dialyseer vaak PBS oplossing dat werkt wel goed.

MVG Ron





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures