Springen naar inhoud

FPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Lange B

    Lange B


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 februari 2005 - 18:08

Eey,

Heeft iemand misschien het principe en een voorschrift van FPLC?

Bij voorbaat dank

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 februari 2005 - 18:22

FPLC, als in Fast Protein Liquid Chromatography? ('khad er eerlijk gezegd nog nooit van gehoord :) )

volgens mij is hier vrij veel over te vinden op internet!

google bijvoorbeeld 8-[

Grtz Bas

ps: als je een voorschrift wil hebben is het denk ik handig als je een voorbeeld geeft in welke richting jij het zoekt?!

#3

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 20 februari 2005 - 18:36

yep ik heb er mee gewerkt. Kijk maar eens op deze site. Hier staat nogal wat informatie over een aantal verschillende kolommen. Ik plaats morgen wel een voorschrift op het forum met principes van deze methode. Ik heb het op mijn werk liggen.

MvG Ron

#4

Lange B

    Lange B


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 februari 2005 - 20:42

Geweldig!

Het is de bedoeling dat ik Nisine, diacetyl en alanine aantoon en opzuiver. En ik had van verschillende mensen gehoord dat FPLC de beste methode is.

#5

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 20 februari 2005 - 21:23

Het principe is eigenlijk dat je het genoemde product laat plakken aan het biomateriaal van de kolom. De buffers met verschillende pH niveau's worden als elutie dan wel doorspoel buffer gebruikt. Voorbeeld.
IgG bindt aan een specifieke G protein kolom bij een pH van 7 en het serum loopt er doorheen. Doormiddel van een elutiebuffer bij een pH van 2.7 haal je het eiwit van de kolom.

MvG Ron

#6

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 februari 2005 - 08:12

FPLC is dus eigenlijk een vorm van immuno affinity chromatografie? Dus gewoon een "mode" naam om weer iets "nieuws" op de markt te brengen?

Veranderd door JeroenC, 21 februari 2005 - 08:12


#7

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 21 februari 2005 - 08:51

Materiaal
Protein G kolom 5 ml ( Hitrap kolom)
Bindingsbuffer 20 mM fosfaatbuffer pH 7
Elutiebuffer: 100 mM glycinebuffer pH 2,7
0.45 μM filters
Steriele fles(500 ml)
20% ethanol oplossing
1M tris-HCl buffer
Serum FCS
10 ml buizen
Spectrofotometer
Quartz cuvetten

protocol
Buffers (20 mM fosfaatbuffer pH7.0, 100mM glycine buffer 2.7) uit de koelkast halen en op kamertemperatuur brengen. H2O en 20% ethanol klaarzetten  Haal de buffers over een 0.45um filter.
Equilibeer de kolom met 20% ethanol.
Equilibreer de kolom met 10 kolomvolumes fosfaatbuffer.
Equilibeer de kolom met 10 kolomvolumes glycinebuffer.
Equilibeer de kolom met 10 kolomvolumes fosfaatbuffer.
Serum ontdooien en op kamertemperatuur brengen in koud water. En over een 0.45 uM filter halen.
Hang de aanvoerslang van de pomp in het supernatant.
Vang het serum op in een steriele buizen.(50 ml)
Zet programma op pauze en doe de slang weer in de fosfaatbuffer.
Spoel de kolom met 4x kolomvolumes fosfaatbuffer. De kolom ontkleurt.
Elueer de IgG met 5x kolomvolumes Elutiebuffer en equilibeer weer met 10x kolomvolumes fosfaatbuffer.
Vang IgG fracties op in twee steriele 10 ml buizen aangevuld met 1 M Tris HCl.
Meet de extinctie bij 280 nm van de fracties en bepaal gehalte aan IgG.
Dialyseren van de IgG. En bewaren bij -20 ˚C.
Kolom doorspoelen met 20% ethanol.
[IgG] bepalen bij 280 nm.


Voorbeeld voorschrift

MvG Ron





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures