Springen naar inhoud

HiTrap 5 ml protein G kolom


  • Log in om te kunnen reageren

#1

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 20 april 2005 - 15:02

Ik heb een HiTrap kolom droog laten lopen. Dat is natuurlijk oerdom :D Maar ik moest nog wat bespreken en toen liep de kolom droog naar het spoelen met 20% ethanol (foutje bedankt). Normaal gesproken haal je het kolom materiaal er weer af en breng je het er weer op nieuw op. Maar het geval is het is zo'n kant en klaar kolom van hitrap. Ik dacht er aan om het materiaal nogmaals door de spoelen met 20% ethanol en dan ook nog weer terug halen om de luchtbellen er uit te halen bij een lage snelheid. Overnachten laten spoelen. Heeft iemand van jullie dit ook eens mee gemaakt. Ik hoop dat hij het nog doet want ze kosten 600 euro. ;)

MvG Ron

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 april 2005 - 16:55

Zijn er geen calibratieprocedures voor je kolombedding? Je zou zo het materiaal zo weer moet kunnen regenereren met iets. Hoe dit precies gaat weet ik niet, misschien weet een van de analytici het wel, zijn ze toch nog ergens goed voor FLAME (in de biochemie ;))

#3

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 21 april 2005 - 08:57

Ik heb hem de hele nacht door laten spoelen met 20% ethanol de kolom pakking ziet er nog wel redelijk uit geen lucht of droge stukken. Structuur lijkt compact. Ik heb hem nog doorgespoeld met loopbuffer pH 7.0 en elutie buffer 2.7 er is geen piek te vinden bij de buffers, dus er is geen pakking verloren gaan. Tenminste dat hoop ik ;) Ik ga vandaag sub van een hybridoma er overheen gooien en dan hoop ik dat het antilichaam er aan blijft hangen.

MvG Ron

#4

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 22 april 2005 - 10:05

De methode hier boven beschreven is dus ideaal voor het regeneren van dit type kolom. :D Ik heb er zo'n 600 ml sub. Over heen laten lopen. Dit duurde ongeveer 5 uur ;) en daarna het IgG er af gehaald. En tot mijn genoegen was er een hoge opbrengst aan IgG en de kolom heeft het gehouden. Ik herhaal het experiment vandaag weer met 600 ml sub.
Dus tip: zelfs voorgepakte kolommen kun je regeneren al wil je fabrikant het natuurlijk niet hebben want hij wil zoveel mogelijk kolommen verkopen :P

MvG Ron

#5

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 22 april 2005 - 12:49

Dus tip: zelfs voorgepakte kolommen kun je regeneren al wil je fabrikant het natuurlijk niet hebben want hij wil zoveel mogelijk kolommen verkopen


dat klopt. Zolang bij het droog lopen geen gaten in je pakking zijn gekomen, kan je een kolom regeneren.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures