Ik heb een probleem. Ik hoop dat jullie mijn kunnen helpen.
De Hplc apparatuur waarmee ik werk bestaat uitde volgende onderdelen:
pomp: Perkin Elmer serie 200
Kolom: RP C18 Kolom van J.T. Baker
Detector: 785A Programmable Absorbance Detector.
Het probleem is dat de druk die de pomp bij verschillende flows aangeeft systematische te laag is. Bijvoorbeeld bij een flow van 0.5 ml/min hoort een druk van ongeveer 1480 PSI nu geeft het een druk van ongeveer 510 PSI.
Wat mij verteld is dat als de druk laag is het door lucht dat in het eluens zit komt.
Ik controleer of er lucht in het eluens zit door een dichte spuit op een draaiventiel te zetten vervolgens de ventiel open te draaien, de spuit langzaam iets uit te trekken en dan komt er loopvloeistof in de spuit en als er lucht in zit dus ook lucht. Draai het ventiel vervolgens goed dicht en haal de spuit er van af. Ik heb dit verschillende malen gecontroleerd en er zit geen lucht in. Wel is het zo, als ik op lucht gecontroleerd heb en er zit geen lucht in de druk iets oploopt naar 600.
Waar kan het allemaal aan liggen?
Kan het misschien aan een draai ventiel liggen?
Wat kan ik allemaal doen om dit probleem te verhelpen?
Groeten,
Jane
Laatste berichten
-
16:45
wig 8
-
15:56
Programmeren met vectoren 6
-
14:53
Straatklok loopt 5 minuten voor 12
-
23:12
speciale rel. theorie 10
-
22:36
Gravity and gravitation 4
-
22:24
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 10
-
19:47
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
19:44
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
19:12
Rood laserlicht 3
-
25 apr
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
25 apr
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
25 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
25 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
25 apr
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
25 apr
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
23 apr
Weerfrustratie 9
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
HPLC pomp Perkin Elmer serie 200
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 1.153
Re: HPLC pomp Perkin Elmer serie 200
Ten eerste welke vloeistof pomp je? Is dit anders dan voor heen? Wat zijn de diameters van de kolom?
Heb je de flow gecontroleerd? door een bepaalde tijd vloeistof op te vangen en te wegen? Is dit goed met wat je display aangeeft?
Wat heb je PRECIES gedaan tussen de tijd dat de drup 1480 psi was en nu 510 psi?
heb je tubing vervangen?
Dus geef wat meer waarden, dan kunnen we vast wel helpen.
Heb je de flow gecontroleerd? door een bepaalde tijd vloeistof op te vangen en te wegen? Is dit goed met wat je display aangeeft?
Wat heb je PRECIES gedaan tussen de tijd dat de drup 1480 psi was en nu 510 psi?
heb je tubing vervangen?
Dus geef wat meer waarden, dan kunnen we vast wel helpen.
-
- Berichten: 50
Re: HPLC pomp Perkin Elmer serie 200
De bepaling die ik op de HPLC wil uitvoeren heb ik eerst met het loopmiddel Methanol/water (75%/25%) uitgevoerd. De bepaling ging goed en heb toen bij een flow van 0.5 ml/min een druk van ongeveer 1480 PSI gemeten. De loopvloeistof was methanol (met methanol wordt de kolom aan het einde van de dag gespoeld) wil dezelfde bepaling met een ander loopmiddel namelijk Acetonitrill/water (80% /20%) uitvoeren en toen ging het mis. Ik ben nu vanaf 9:45 uur weer methanol als loopvloeistof aan het gebruiken en nog steeds hetzelfde probleem.
Wat ik precies gedaan denk te hebben is alleen van loopvloeistof veranderd en toen ik zag dat de druk laag was heb ik het gecontroleerd op lucht.
Heb zojuist de flow gecontroleerd en deze geeft de juiste waar aan namelijk 0,5 ml/min bij een druk nu van 800 PSI
Kan dit komen door bij een druk hoger dan 200 PSI de pomp stop te zetten?
Groeten, Jane
Wat ik precies gedaan denk te hebben is alleen van loopvloeistof veranderd en toen ik zag dat de druk laag was heb ik het gecontroleerd op lucht.
Heb zojuist de flow gecontroleerd en deze geeft de juiste waar aan namelijk 0,5 ml/min bij een druk nu van 800 PSI
Kan dit komen door bij een druk hoger dan 200 PSI de pomp stop te zetten?
Groeten, Jane
-
- Berichten: 1.153
Re: HPLC pomp Perkin Elmer serie 200
door de viscositeit verschillen tussen de MeOH/H2O en ACN/H2O mengsels kan je inderdaad druk verschillen krijgen. Nu ben je weer terug gestapt op het MeOH mengsel en zie je dat de druk ten opzichte van vanmorgen weer hoger is geworden. Dus ik zou zeggen dat dit een oorzaak kan zijn.
Daarnaast heb je nog een probleem met je ACN/H2O mengsel. ACN en water mengen gaat ALTIJD gepaard met lucht vorming. Heb je goed ontgast? En heb je na de MeOH/H2O eerst gespoeld met water alleen? en daarna het ACN/H2O mengsel? of ben je meteen naar het ACN/H2O mengsel gegaan; dan kan je last hebben van lucht in je tubing. Dan zou ik zeggen spoel eerst je hele systeem door met heel veel ACN/H2O mengsel om al het lucht uit je systeem te krijgen. (wel je ACN/H2O mengsel goed ontluchten met helium en/og ultrasoon) Mocht je het niet lucht vrij krijgen kan je in UITERSTE noodzaak met iospropanol door het hele systeem (niet over je kolom!!!) spoelen. En dan het ACN/H2O mengsel weer gebruiken en dan pas je kolom er weer tussen.
Daarnaast heb je nog een probleem met je ACN/H2O mengsel. ACN en water mengen gaat ALTIJD gepaard met lucht vorming. Heb je goed ontgast? En heb je na de MeOH/H2O eerst gespoeld met water alleen? en daarna het ACN/H2O mengsel? of ben je meteen naar het ACN/H2O mengsel gegaan; dan kan je last hebben van lucht in je tubing. Dan zou ik zeggen spoel eerst je hele systeem door met heel veel ACN/H2O mengsel om al het lucht uit je systeem te krijgen. (wel je ACN/H2O mengsel goed ontluchten met helium en/og ultrasoon) Mocht je het niet lucht vrij krijgen kan je in UITERSTE noodzaak met iospropanol door het hele systeem (niet over je kolom!!!) spoelen. En dan het ACN/H2O mengsel weer gebruiken en dan pas je kolom er weer tussen.
Wat bedoel je hier mee?Kan dit komen door bij een druk hoger dan 200 PSI de pomp stop te zetten?
-
- Berichten: 50
Re: HPLC pomp Perkin Elmer serie 200
Dank je wel voor je reacties en sugesties.
Op het lab is er geen appart systeem om je eluens te ontgassen. Aan het HPLC systeem is alleen een vacuum apparaat (op het aparaat staat aleen vacuum) gekoppeld. Wat mij verteld is dat extra ontgassen niet nodig is doordat dit apparaat aan het systeem gekoppeld is.
Na methanol/water heb ik niet gespoeld met water maar met methanol. Heb geen een keer alleen met water gespoeld heb meteen met ACN/water gebruikt.
Als ik het mengsel ACN/H2O niet meer hoef te gebruiken wat (behalve spoelen met Isopropanol) raad je me dan aan om het systeem luchtvrij te krijgen (Methanol loopt nog steeds door het systeem op dit moment).
Groeten,
Jane
Op het lab is er geen appart systeem om je eluens te ontgassen. Aan het HPLC systeem is alleen een vacuum apparaat (op het aparaat staat aleen vacuum) gekoppeld. Wat mij verteld is dat extra ontgassen niet nodig is doordat dit apparaat aan het systeem gekoppeld is.
Na methanol/water heb ik niet gespoeld met water maar met methanol. Heb geen een keer alleen met water gespoeld heb meteen met ACN/water gebruikt.
Als ik het mengsel ACN/H2O niet meer hoef te gebruiken wat (behalve spoelen met Isopropanol) raad je me dan aan om het systeem luchtvrij te krijgen (Methanol loopt nog steeds door het systeem op dit moment).
Wat ik voor de pomp voorgeschreven heb gekregen is de pomp pas bij een druk lager dan 200 PSI uitzetten. Omdat het anders niet goed voor het systeem is.QUOTE
Kan dit komen door bij een druk hoger dan 200 PSI de pomp stop te zetten?
Wat bedoel je hier mee?
Groeten,
Jane
-
- Berichten: 1.153
Re: HPLC pomp Perkin Elmer serie 200
Nou het uitzetten bij hogere druk kan alleen een probleem voor je LC kolom zijn. Maar of je daarvan nou zo'n druk val in je systeem hebt?
Nou het eerste wat ik nu zou doen is spoelen (hoge flow, half uurtje) met alleen H2O; zonder kolom. Dan de flow van 0.5 ml/min instellen 10 minuten wachten. Dan de flow meten. Is dit correct? welke druk? Dan je de vloeistof die je nodig hebt in je LC scheiding. Weer eerst rustig laten stabiliseren. Dan weer flow meten. Klopt dit? welke druk? Dan je Lc ertussen en weer stabiliseren weer flow meten. klopt dit? welke druk? Dan gaan meten.
Nou het eerste wat ik nu zou doen is spoelen (hoge flow, half uurtje) met alleen H2O; zonder kolom. Dan de flow van 0.5 ml/min instellen 10 minuten wachten. Dan de flow meten. Is dit correct? welke druk? Dan je de vloeistof die je nodig hebt in je LC scheiding. Weer eerst rustig laten stabiliseren. Dan weer flow meten. Klopt dit? welke druk? Dan je Lc ertussen en weer stabiliseren weer flow meten. klopt dit? welke druk? Dan gaan meten.
