ik dien het fosfaatgehalte (in mg/ml) van een waterstaal te bepalen, een vial met 5ml waterstaal.
Ik ga dit doen door vorming van een molybdeenblauwfosfaatcomplex
en absorbantiemeting van dit molybdeenblauwfosfaatcomplex. Hoe meer absorbantie hoe groter de concentratie fosfaat.Ik zal eerst kort uitleggen hoe ik tewerk ga om vervolgens mijn probleem te formuleren.
Voor de vorming van dit kleurcomplex gebruik ik een reagens Z. Ik zet een X/Y-grafiek uit met X=concentratie fosfaat van mijn standaarden en Y= absorbantie
De zero-absorbantie bepaal ik dmv een blanco
3ml water + 7 ml reagens Z
Ik gebruik een standaard van 1mM fosfaat voor de aanmaak van verschillende concentraties fosfaat in het molybdeencomplex;
0.1ml 1mM + 2.9ml water + 7ml reagens Z Vtot=10ml
Stand 1mM 100x=0.01mM
zo ook met 0.2/0.4/0.6/0.8/1.0 ml 1mM
ik heb standaarden van 0.01mM, 0.02mM, 0.04mM, 0.06mM, 0.08mM en 1.0mM
De blanco en de standaarden meet ik twee keer. Ik heb dus te maken met enkelvoudige lineaire regressie, de correlatiecoëfficiënt r geeft een lineair verband en ik bepaal de rechte dmv de kleinste-kwadraten-methode.
Mijn waterstaal verdun ik 10x en ik neem 0.5ml voor de vorming van het kleurcomplex
0.5ml staal + 2.5mlwater + 7ml reagens Z Vtot=10ml
Hypothese; wanneer ik de absorbantie van dit staal meet bij 650nm, krijg ik een absorbantie die bijv. overeenkomt met 0.07mM (afleiden uit grafiek)
In de 10ml=Vtot van kleurcomplexvorming zit dus
0.07mmom/l x 0.01l = 0.0007mmol fosfaat
Deze hoeveelheid is afkomstig van 0.5ml staal gebruikt voor de kleurreactie, dus mijn staal heeft een concentratie fosfaat van
0.0007mmol / 0.5ml = 0.0014 mmol/ml
Mijn staal werd oorspronkelijk 10x verdund, dus de concentratie fosfaat van mijn staal is
0.014 mmol/ml met MM fosfaat= 95g/mol=95mg/mmol
= 1.33 mg/ml
Dit is de redenering die volgens mij juist is. Nu heb ik echter een formule bij deze methode
[fosfaat in mg/ml]= A x B x C x D x 1/V
met A = hoeveelheid fosfaat uitgedrukt in µmol
B = MM fosfaat 95mg/mmol
C = verdunningsfactor van het staal, dus 10x
D = eenheidsfactor [1mM/1000µmol]
V = volume van het staal, dus 0.5 ml
Volgens de redenering die ik gemaakt heb en waarbij ik gewerkt heb voor A in mmol ipv µmol heb ik D niet nodig.
Stel dat ik A wel in µmol zou uitdrukken dan moet ik rekening houden met de eenheidsfactor D. Wanneer ik dit doe volgens de formule kan ik volgens mij onmogelijk mijn resultaat bekomen in mg/ml gezien er een eenheid liter overbijft van 1mM/1000µmol.
Zit ik bijgevolg dus ergens verkeerd in mijn redenering of klopt de eenheidsfactor niet wanneer ik A uitdruk in µmol. Volgens mij klopt de eenhedsfactor niet??
Volgens mijn redenering:
0.0007mmol x 95mg/mmol x 10 x 1/0.5ml = 1.33mg/ml
gebruik D overbodig
Volgens de formule:
0.7µmol x 95mg/mmol x 10 x 1/0.5ml x 1mmol/l x 1/1000µmol = 1.33 mg/liter.ml
Het resultaat is hetzelfde maar de eenheid liter blijft over wanneer ik de formule gebruik??
Indien iemand dezelfde mening deelt...super, indien niet, dan weet ik bijgevolg ook waar ik verkeerd zit, maar nogmaals, ik denk dat mijn redenering correct is
Effe de hersenen pijnigen zou ik zeggen
