Springen naar inhoud

genenbanken


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Buckyball

    Buckyball


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 juni 2005 - 16:52

Hoi Hoi,

Ik ben mijn moleculaire biologie aan het leren en ik zit met een vraagje. Het gaat voor het maken van genenbanken met de werkwijze van Maniatis.
In mijn cursus kan ik vinden dat het hoog moleculair DNA geknipt wordt met Hae III en Alu I. Er staat bij dat deze restrictie enzymens knipplaatsen hebben om de ongeveer 250 basenparen. Dit wil toch zeggen dat het het DNA in kleine stukken gaat knippen?
Toch lees ik verder dat ze op grootte worden gefractioneerd en dat alleen de stukken DNA tot 20 Kbp eruit worden gehaald.

Nu ben ik een beetje verward, ze gebruiken restrictie enzymens die het DNA in korte sequenties gaan knippen maar de sequenties moeten ongeveer 20 Kbp groot zijn want anders kan je ze niet inbouwen in de λ faag.
Er staat niets in de cursus over de inwerkingstijd van de enzymens, zou het kunnen dat deze zeer kort zijn?
Weet hier iemand het antwoord op??

MVG
Caroline

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 16 juni 2005 - 13:52

Ik zit niet echt in deze materie. Dat moet als het goed is komen als mij een baan wordt aangebonden waarbij onder andere deze technieken worden toegepast. Hierdoor krijg ik natuurlijk ook weer meer ervaring en kan ik meer mensen helpen op het forum. Maar goed ik probeer toch wel wat en aanvullingen dan wel wijzigingen zullen dan wel volgen.
Geplaatste afbeelding
referentie

De restrictie enzymen knippen alleen om de plekken waar een specifieke volgorde voorkomt zoals bijvoorbeeld bij HaeIII
5'GGCC3'
3'CCGG5'
Hier zullen dus deze enzymen gaan knippen.
Misschien zou het kunnen dat ze een bepaald gen uit het DNA gaan knippen van 20 kbp en dat voor het begin en aan het eind van het DNA knip plaatsen zijn voor dit gen en dat er voor de rest op het gen geen knip plaatsen voorkomt. Dat is volgens mij ook het principe van restrictie enzymen.
factoren die invloed hebben op de restrictie
Ik hoop dat je hier wat aan hebt ik ga nog wel verder zoeken.

MvG Ron

MvG Ron

#3

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 juni 2005 - 15:36

Ik denk toch dat je hier inderdaad te maken hebt met een partiele digestie.
Aangezien je restrictieenzymen statistisch rond de 250 bp zouden moeten knippen zou ik niet anders kunnen concluderen dat wanneer je 20 kp fragmenten wilt, dat je de tijd die staat voor volledige digestie moet reduceren om toch grotere fragmenten te krijgen.

Ik kan niet vinden in mijn genoom bijbel over de methode van Maniatis, maar zie er wel in dat een partiele digestie heel normaal is.

Denk dus dat het wel klopt...

Succes!

#4

Buckyball

    Buckyball


  • 0 - 25 berichten
  • 18 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 16 juni 2005 - 16:16

Dank je wel!!!
Ik heb pas dinsdag mijn examen dus kan er nog eens rustig over nadenken ;)
Alvast heel erg bedankt

groetjes
Caroline





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures