Springen naar inhoud

Extractie middel


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Jane_CF

    Jane_CF


  • >25 berichten
  • 50 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 augustus 2005 - 10:16

Gradient analyse

Monster

Extract Material

Accurately weigh approximately 0.06 g of dry plantextract and place into a centrifuge tube. Add exactly 25 mL of ethanol:water (70:30) and shake for 15 minutes.

Centrifuge the sample (or filter through 0.45 m PVDF or PTFE) into an HPLC vial and cap the vial.

HPLC
Chromatographic Conditions:

Column: Phenomenex Prodigyâ„¢ ODS(3), 5m, 100å, 4.6 x 250 mm

Column Temperature: 35C

Tijd(min) ;% CH3CN ;% fosforzuur 0.1M ;Flow (ml/min)
0 ;10 ;90 ;1.5
13 ;22 ;78 ;1.5
14 ;40 ;60 ;1.5
14.5 ;40 ;60 ;1.5
15 ;10 ;90 ;1.5
20 ;10 ;90 ;1.5

Injection Volume: 5 L

Detection Volume: 330nm

Run Time: 20 minutes

http://www.nsf.org/b...asp?program=INA

Ik kan aleen een isocratische analyse uitvoeren.
Wat ik nu probeer te doen is het verkrijgen van een goed gescheiden piek in het extract. Ik gebruik de HPLC instellingen:
Loopmiddel: CH3CN + 0.1 M H3PO4: H2O+0.1 M H3PO4 (24%+1%:74%+1%)
Flow_ 0.2 ml/min.
Injectie volume 20 L
Detectie golflengte: 330nm.
Runtijd:30 min.

Het monster heb ik met de bovenstaande extractiemidel bewerkt en geinjecteerd. Heb niet een goed gescheiden piek gekregen.
Wat kan ik doen om bij deze HPLC-instellingen een goed gescheiden piek te verkrijgen?

Groeten,
Jane

Jorim: Gebruik sub- en superscript aub! Bekijk de helpfunctie hoe sub- en superscript te gebruiken.

Veranderd door Jorim, 04 augustus 2005 - 11:55


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 augustus 2005 - 10:23

tja waarom wil je isocratisch werken?

Maar als je echt iso wilt. kan je 2 dingen proberen.
1. 5% minder aceto nemen, je run wordt wel langer.
2. pH aanpassen.

#3

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 augustus 2005 - 12:48

Je zit ook veeeeeeellll te laag met je flow rate! De optimum flowrate van de kolom is 1.5 ml/min heb ik het idee als ik kijk op de link die jij geeft, en naar de expirimenten kijk op de site van de fabrikant. Wat is de reden dat je hier vanaf wijkt? Ik kan eigenlijk alleen maar nadelen bedenken als je het bekijkt vanaf het aantal schotels dat je hebt. Dit wil je juist maximaliseren omdat je de pieken al niet gescheiden hebt.

Verder zeg je alleen dat 2 pieken niet gescheiden zijn, welke 2 stoffen zijn dat? Als het 2 zuren zijn zul je de pH met een plan moeten gaan veranderen. Dus kijk eens naar de pKa van deze zuren (bedenk wel dat je analyse er waarschijnlijk niet stabieler op gaat worden).

De gradient elutie dus juist ontwikkeld om dit soort problemen op te lossen, en een analyse in een zo kort mogelijk tijdsbestek te laten verlopen.

#4

Jane_CF

    Jane_CF


  • >25 berichten
  • 50 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 augustus 2005 - 11:26

Ik kan niet anders dan isocratisch werken omdat er apparatuur aanwezig is waarmee alleen isocratische analyses uitgevoerd kan worden.

Wat de twee pieken betreft weet ik niet wat voor stof de andere piek is. Ik kan ook niet achterhalen wat deze piek is omdat het niet bekend is wat het is.

Ik weet alleen dat de stof echinacoside 1 piek daarvan moet zijn.

Veranderd door Jane, 08 augustus 2005 - 11:27


#5

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 augustus 2005 - 11:45

Met een MS zou je de stof kunnen achterhalen. Tevens kun je misschien in de literatuur wat referentie chromatogrammen vinden. Maar waarom werk je nu bij een flow van 0.2ml/min?

edit: sorry had je andere post nog niet gelezen, vergeet de vraag van 0.2 ml/min maar :)

Veranderd door Napoleon1981, 08 augustus 2005 - 11:47






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures