Extractie middel

Jane_CF

Gradient analyse

Monster

Extract Material

Accurately weigh approximately 0.06 g of dry plantextract and place into a centrifuge tube. Add exactly 25 mL of ethanol:water (70:30) and shake for 15 minutes.

Centrifuge the sample (or filter through 0.45 µm PVDF or PTFE) into an HPLC vial and cap the vial.

HPLC

Chromatographic Conditions:

Column: Phenomenex ProdigyÃ¢âÂ¢ ODS(3), 5µm, 100Ã¥, 4.6 x 250 mm

Column Temperature: 35°C

Tijd(min) ;% CH₃CN ;% fosforzuur 0.1M ;Flow (ml/min)

0 ;10 ;90 ;1.5

13 ;22 ;78 ;1.5

14 ;40 ;60 ;1.5

14.5 ;40 ;60 ;1.5

15 ;10 ;90 ;1.5

20 ;10 ;90 ;1.5

Injection Volume: 5 µL

Detection Volume: 330nm

Run Time: 20 minutes

http://www.nsf.org/business/ina/echinacea.asp?program=INA

Ik kan aleen een isocratische analyse uitvoeren.

Wat ik nu probeer te doen is het verkrijgen van een goed gescheiden piek in het extract. Ik gebruik de HPLC instellingen:

Loopmiddel: CH₃CN + 0.1 M H₃PO₄: H₂O+0.1 M H₃PO₄ (24%+1%:74%+1%)

Flow_ 0.2 ml/min.

Injectie volume 20 µL

Detectie golflengte: 330nm.

Runtijd:30 min.

Het monster heb ik met de bovenstaande extractiemidel bewerkt en geinjecteerd. Heb niet een goed gescheiden piek gekregen.

Wat kan ik doen om bij deze HPLC-instellingen een goed gescheiden piek te verkrijgen?

Groeten,

Jane

Jorim: Gebruik sub- en superscript aub! Bekijk de helpfunctie hoe sub- en superscript te gebruiken.

JeroenCV

tja waarom wil je isocratisch werken?

Maar als je echt iso wilt. kan je 2 dingen proberen.

1. 5% minder aceto nemen, je run wordt wel langer.

2. pH aanpassen.

Napoleon1981

Je zit ook veeeeeeellll te laag met je flow rate! De optimum flowrate van de kolom is 1.5 ml/min heb ik het idee als ik kijk op de link die jij geeft, en naar de expirimenten kijk op de site van de fabrikant. Wat is de reden dat je hier vanaf wijkt? Ik kan eigenlijk alleen maar nadelen bedenken als je het bekijkt vanaf het aantal schotels dat je hebt. Dit wil je juist maximaliseren omdat je de pieken al niet gescheiden hebt.

Verder zeg je alleen dat 2 pieken niet gescheiden zijn, welke 2 stoffen zijn dat? Als het 2 zuren zijn zul je de pH met een plan moeten gaan veranderen. Dus kijk eens naar de pKa van deze zuren (bedenk wel dat je analyse er waarschijnlijk niet stabieler op gaat worden).

De gradient elutie dus juist ontwikkeld om dit soort problemen op te lossen, en een analyse in een zo kort mogelijk tijdsbestek te laten verlopen.

Jane_CF

Ik kan niet anders dan isocratisch werken omdat er apparatuur aanwezig is waarmee alleen isocratische analyses uitgevoerd kan worden.

Wat de twee pieken betreft weet ik niet wat voor stof de andere piek is. Ik kan ook niet achterhalen wat deze piek is omdat het niet bekend is wat het is.

Ik weet alleen dat de stof echinacoside 1 piek daarvan moet zijn.

Napoleon1981

Met een MS zou je de stof kunnen achterhalen. Tevens kun je misschien in de literatuur wat referentie chromatogrammen vinden. Maar waarom werk je nu bij een flow van 0.2ml/min?

edit: sorry had je andere post nog niet gelezen, vergeet de vraag van 0.2 ml/min maar

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Extractie middel

Extractie middel

Re: Extractie middel

Re: Extractie middel

Re: Extractie middel

Re: Extractie middel