Inverse PCR

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 5

Inverse PCR

Kan iemand me helpen uit te leggen hoe 'inverse PCR' werkt?

Werk je dan ook gewoon met een forward en backward primer of hoe zit het juist?

Mvg

Berichten: 9

Re: Inverse PCR

Bij inverse PCR gaat men een onbekende sequentie amplificeren. Deze onbekende sequentie is hierbij gelegen naast een gekende sequentie.

Om dit te bekomen, werkt men ook met primers, maar deze worden in omgekeerde (inverse) richting aangebracht op de gekende sequentie (zie afbeelding). Vervolgens worden de uiteinden van de gekende sequentie en de onbekende sequentie gedigereerd met een restrictie enzym (zie restrictie A) om ze vervolgens te kunnen ligeren zodat we circulair DNA verkrijgen. Dit circulair DNA wordt vervolgens terug geknipt (zie restrictie B), zodat de primers in goede richting georiënteerd zijn om amplificatie toe te laten van de onbekende sequentie.

Afbeelding Inverse

Reageer