Springen naar inhoud

Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli


  • Log in om te kunnen reageren

#1

UMBRELLA

    UMBRELLA


  • >25 berichten
  • 38 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 augustus 2005 - 11:40

Hallo Allemaal.... :)

Ik ben op zoek naar protocol of iets wat zou mij kunnen helpen om eigen Tag DNA polimerase isoleren, zuiveren en PCRen uit E.coli!!! Geplaatste afbeelding

Ik heb wat gevonden over en schrijver die zou als goed is deze handelingen heb beschrijven, maar ik kon die niet vinden of wat dan ook.
Boek titel van schrijver: Lawyer, F.C. (PCR Methods Appl.) (1993)

Bedankt voor alle hulp al vast :)

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 augustus 2005 - 15:26

Je bedoelt vast Taq polymerase(uit T. Aquaticus)... Ik heb je titel even veranderd...

#3

Doom_Knight

    Doom_Knight


  • >100 berichten
  • 232 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 augustus 2005 - 18:12

Het DNA polymerase zit in de kern dus zal je alleszinds de kern moeten openkrijgen. Ik herinner me ooit een proefje dat ik gedaan heb om DNA uit uien te extraheren (DNA extractie is een klassieker), hiervoor gebruikten we zeep als ik me niet vergis, dus je kan misschien dezelfde procedure, lichtjes aangepast, toepassen op je T. Aquaticus ???

#4

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 augustus 2005 - 18:17

Even voor de duidelijkheid: het is de bedoeling om Taq polymerase tot overexpressie te brengen in E. Coli, het is dus niet de polymerase van E. Coli zelf.
Hiervoor moet Taq pol eerst gekloneerd worden met behulp van plasmiden.

#5

UMBRELLA

    UMBRELLA


  • >25 berichten
  • 38 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 augustus 2005 - 18:21

Ja, inderdaad die bedoel ikâ€Â¦..sorry dat ik heb niet bij gezegd.

#6

UMBRELLA

    UMBRELLA


  • >25 berichten
  • 38 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 augustus 2005 - 12:02

Sorry voor verkeerde informatie.

Hier is echt bedoeling:
Het gaat over de Gemodificeerde E.coli waar zit al Tag DNA (T. Aquaticus) en moet in fermentor gekwekt en dan isoleren en zuiveren en PCR is de test of de productie en zuivering gelukt is.

Ik heb al gevonden het medium dat goed is voor: LB Broth (per liter)

10g NaCl
10g Tryptone
5g Yeast extract
Toevoegen van H2O tot aan 1 Liter. Stelen met pH 7.0 met 5N NaOH.
En autoclaven.

Ik vroeg mij af welke substraat is goed om E.coli tijdens fermentatie (continue-batch) in leven houden. En hoe zal ik Tag isoleren en zuiveren..Protocol. Als iemand weet waar zal ik die kunnen vinden of hint A.U.B.

En nog een vraag hoe zal ik kunnen met PCR test uitvoeren om te kijken hoe zuiver is geworden.

Al vast bedankt en Sorry voor onduidelijkheid.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures