Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli

Moderator: ArcherBarry

Reageer

Bericht 29-08-'05, 12:40

UMBRELLA

Berichten: 38

Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli

Hallo Allemaal.... :)

Ik ben op zoek naar protocol of iets wat zou mij kunnen helpen om eigen Tag DNA polimerase isoleren, zuiveren en PCRen uit E.coli!!! Afbeelding

Ik heb wat gevonden over en schrijver die zou als goed is deze handelingen heb beschrijven, maar ik kon die niet vinden of wat dan ook.

Boek titel van schrijver: Lawyer, F.C. (PCR Methods Appl.) (1993)

Bedankt voor alle hulp al vast :)
Omhoog

Bericht 29-08-'05, 16:26

Gideon

Berichten: 337

Re: Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli

Je bedoelt vast Taq polymerase(uit T. Aquaticus)... Ik heb je titel even veranderd...
Omhoog

Bericht 29-08-'05, 19:12

Doom_Knight

Berichten: 232

Re: Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli

Het DNA polymerase zit in de kern dus zal je alleszinds de kern moeten openkrijgen. Ik herinner me ooit een proefje dat ik gedaan heb om DNA uit uien te extraheren (DNA extractie is een klassieker), hiervoor gebruikten we zeep als ik me niet vergis, dus je kan misschien dezelfde procedure, lichtjes aangepast, toepassen op je T. Aquaticus ???
Omhoog

Bericht 29-08-'05, 19:17

Gideon

Berichten: 337

Re: Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli

Even voor de duidelijkheid: het is de bedoeling om Taq polymerase tot overexpressie te brengen in E. Coli, het is dus niet de polymerase van E. Coli zelf.

Hiervoor moet Taq pol eerst gekloneerd worden met behulp van plasmiden.
Omhoog

Bericht 29-08-'05, 19:21

UMBRELLA

Berichten: 38

Re: Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli

Ja, inderdaad die bedoel ikâ€Â¦..sorry dat ik heb niet bij gezegd.
Omhoog

Bericht 31-08-'05, 13:02

UMBRELLA

Berichten: 38

Re: Maak je eigen Taq Polymerase uit E.coli

Sorry voor verkeerde informatie.

Hier is echt bedoeling:

Het gaat over de Gemodificeerde E.coli waar zit al Tag DNA (T. Aquaticus) en moet in fermentor gekwekt en dan isoleren en zuiveren en PCR is de test of de productie en zuivering gelukt is.

Ik heb al gevonden het medium dat goed is voor: LB Broth (per liter)

10g NaCl

10g Tryptone

5g Yeast extract

Toevoegen van H2O tot aan 1 Liter.

Stelen met pH 7.0 met 5N NaOH.

En autoclaven.

Ik vroeg mij af welke substraat is goed om E.coli tijdens fermentatie (continue-batch) in leven houden. En hoe zal ik Tag isoleren en zuiveren..Protocol. Als iemand weet waar zal ik die kunnen vinden of hint A.U.B.

En nog een vraag hoe zal ik kunnen met PCR test uitvoeren om te kijken hoe zuiver is geworden.

Al vast bedankt en Sorry voor onduidelijkheid.
Omhoog
Reageer

Terug naar “Moleculaire biologie en biochemie”