Springen naar inhoud

MDH zuiveren uit runderhart


  • Log in om te kunnen reageren

#1

skaren

    skaren


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 september 2005 - 12:47

Hoi allemaal!

Ik heb op school de opdracht gekregen om malaat dehydrogenase te zuiveren uit runderhart. En verder moeten we alles zelf uitzoeken. Ik kan alleen niet de volledige informatie/protocollen vinden.

Heeft iemand een protocol voor het zuiveren van cytosolisch en/of mitochondriaal MDH uit hartweefsel?
Ik heb wel een protocol gevonden over hoe je mitochondrien uit hartweefsel moet centrifugeren maar daar wordt een andere stof gezocht dan MDH. Ik heb ook protocollen gevonden waar MDH wordt gecentrifugeerd maar dan uit bacterien of schimmels. Deze kan ik denk ik niet gebruiken omdat gezuiverd moet worden van andere stoffen dan...toch?

Dus....zou iemand mij kunnen helpen aan een protocol voor het zuiveren van MDH uit runderhart, of kunnen uitleggen hoe ik moet centrifugeren om de fractie waar MDH in zit (cytosol en mitochondria, MDH = 70 kDa) over te houden?
(en misschien nog informatie over verdere zuivering)

Alvast bedankt!

Karen

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

sdekivit

    sdekivit


  • >250 berichten
  • 704 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 september 2005 - 15:33

ik heb wel een protocol voor een LDH-zuivering uit kippenlever. dit gaat op eenzelfde manier gaat als MDH zuiveren, alleen moet je zorgen dat je een voor dit enzym specifiek substraat toevoegt voor je meting.

Protocol uitgaande van het homogenaat dat je eerst zult moeten maken.

* centrifugeren: 5 minuten bij 2200 rpm. Supernatant gebruiken voor enzymactiviteit (post nucleaire supernatant).

* supernatant afpipetteren. 1 mL per portie. Vier porties voor centrifugatie.

* centrifugeren: 10 minuten bij maximaal toerental (12.000 g). Supernatant gebruiken voor enzymbepaling (cytosol). Pellet bevat onder andere mitochomndiren.

* 1 mL homogenisatiemiddel toevoegen aan het supernatant en resuspenderen.

* centrifugeren bij maximaal toerental gedurende 5 minuten. Supernatant afpipetteren.

* opnieuw 1 mL homogenisatiemiddel toevoegen en resuspenderen en ook weer centrifugeren bij 12.000 g gedurende 5 minuten.

* supernatant afpipetteren

* opnieuw resuspenderen en voor de 5e en laatste keer centrifugeren gedurende 5 minuten bij 2200 rpm. Het supernatant gebruik je nu voor de activiteitsmeting binnen het mitochondrion.

#3

skaren

    skaren


  • 0 - 25 berichten
  • 6 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 september 2005 - 21:19

Ej bedankt! Je hebt me echt geholpen! [-X





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures