Wetenschapsforum

Hallo,

Ik studeer scheikunde aan het MLO. Voor een project scheikunde moet ik het gehalte betacaroteen bepalen in gras en spinazie. Hiervoor moet ik zelf voorschriften zoeken. Het probleem is echter dat ik geen voorschriften voor de bepaling van betacaroteen kan vinden. Enkel dat het kan met behulp van een HPLC of spectrofotometrisch, maar niet hoe.

Gegroet,

Jogchem

Ik heb ooit eens chlorofyl en bèta-caroteen geïsoleerd uit spinazie. Ik zoek de procedure even op. Ik weet echter niet of deze methode ook geschikt is om voor kwantitatieve doeleinden. De onderstaande methode beschrijft enkel de kwalitatieve isolatie van 2 pigmenten

I) EXTRACTIE

____________

1) +/- 25g spinazie in een kolf van 250 ml doen. 40 ml EtOH toevoegen. 5 minuten laten refluxeren en vervolgens de vloeibare fase decanteren

2) Bij het residu 50 ml heptaan toevoegen + schudden. De vloeistoflaag decanteren bij de ethanolfractie

3) Het mengsel dat je overhoudt door een büchner zonder filtreerpapier gieten, kwestie van de overgebleven spinaziepartikels uit de oplossing te filteren

4) Uw mengsel zou op dit moment uit 2 lagen moeten bestaan. De onderste, lichtgroene laag met de ethanol en het water & de bovenste, donkergroene laag met ethanol en heptaan. De 2 lagen scheiden in een scheitrechter. De ethanol-waterlaag is afval

5)De heptaan-ethanollaag wassen met 40 ml water (de resterende polaire stoffen eruit zuiveren) en vervolgens het geheel drogen met calciumchloride. Hierna damp je je oplossing droog met een roterende vacuümverdamper (ROTAVAP). Het verkregen vast residu los je op in 5 ml heptaan

II) KOLOMCHROMATOGRAFIE

________________________

6) Vul uw kolom met 30g alumina. Gebruik 35ml heptaan als solvent

7) Het spinazieextract op de kolom brengen en heptaan toevoegen tot de gekleurde producten volledig op de alumina vastzitten. Daarna elueren met ether. Er worden 2 banden gevormd: de geel-oranje band (bèta-caroteen) en de groene band (chlorofyl). Op het moment dat de banden ongeveer een centimeter of 3 van elkaar verwijderd zijn, vervang je de ether door een 50/50 ethanol-ether mengsel en elueer je hiermee. Uw kolom mag onder geen enkel geval droog komen te staan.

8) Vang onderaan uw kolom de 2 pigmentfazen op.

Het principe is dus grotendeels gebaseerd op differentiële polariteit/oplosbaarheid van de natuurcomponenten. Hopelijk ben je hier iets mee.

Mvg