Enzym isolatie

Einstein_CF

Hallo allemaal,

voor een project op school moeten we het enzym aminopeptidase uit E.Coli halen. Heeft iemand een idee hoe dat kan, of kan ons meer informatie geven?

Alvast bedankt! Prof Einstein

Gideon: voor zover ik het begrijp wil je een enzym isoleren, vandaar dat ik hem verplaatst heb en een beter passender titel gegeven.

cheMister

In Pubmed zoekt ge naar de sequentie van dat gen. Met het programma webcutter zoekt ge de plaatsen waar ge kunt knippen en met welke enzymen. En dan zou ik ne elektroforese doen voor de scheiding.

Dit is natuurlijk geen correcte handleiding en wa ik hier allemaal zeg is onder voorbehoud want ik ben er al ff uit.

Gideon

In Pubmed zoekt ge naar de sequentie van dat gen. Met het programma webcutter zoekt ge de plaatsen waar ge kunt knippen en met welke enzymen. En dan zou ik ne elektroforese doen voor de scheiding.

Dit is een aardig schot in de goede richting, wanneer je het gen te pakken wilt krijgen voor het aminopeptidase, wat dit ook precies moge zijn.

Het kan zijn dat ik het fout begrepen heb, maar volgens mij gaat om isolatie van het enzym en niet de coderende sequentie.

sdekivit

Einstein schreef: Hallo allemaal,

voor een project op school moeten we het enzym aminopeptidase uit E.Coli halen. Heeft iemand een idee hoe dat kan, of kan ons meer informatie geven?

Alvast bedankt! Prof Einstein

Gideon: voor zover ik het begrijp wil je een enzym isoleren, vandaar dat ik hem verplaatst heb en een beter passender titel gegeven.

je zou een affiniteitschromatografie kunnen doen, waarin je een oplossing waarin zich aminopeptidase A bevindt door een kolom laat stromen waarin zich antlichamen tegen het eiwit bevinden.

Mad-scientist

hoi allemaal

Ik moet voor een school project het g6pd enzym uit mijn eigen bloed isoleren. Heeft iemand een idee hoe ik dit zou kunenn doen ?

alvast bedankt

Jaffaa

Ik zou zeggen, zoek de sequentie van het gen coderend voor je enzym, design hier primers voor. PCR amplificeer dit stuk, zet het in een vector met een eventuele affiniteits tag dmv digestie/ligatie.

Kies een bruikbare host: denk hier bij dat je een humaan eiwit wilt gaan zuiveren, dit heeft complexe post translation modificaties, ook ondergaat het mRNA splicing voordat het uiteindelijk word afgelezen door ribisoom, niet alle organismen kunnen dit.

Zet je je plasmide in je host, breng eiwit tot expressie...
Bedenk een manier om je eiwit uit je cellen te krijgen en zo zuiver mogelijk in een epje (denk aan chromatografie oid).

als allerlaatst zou ik even chenken dmv een 'simpele' biochemische assay of je eiwit ook daadwerlijk actief is.

dit is een beetje een general procedure van eiwit zuivering, geen idee wat de mogelijkheden bij jou op school zijn. de details moet je zelf even verzinnen. mochten er vragen zijn horen we het wel

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

Enzym isolatie

Enzym isolatie

Re: Enzym isolatie

Re: Enzym isolatie

Re: Enzym isolatie

Re: Enzym isolatie

Re: Enzym isolatie