rp-18 hplc

citrobacter

Vandaag hebben we parabenen in shampoo bepaald, met behulp van hplc met een rp-18 kolom, acetonitrile+water als mobiele fase; Weet iemand hoe je de concentratie berekend uit de area (weergegeven bij chromatogram) deze is uitgedrukt in µV * tijd (in seconden) ?

met vriendelijke groet

Fuzzwood

Daar zul je toch een ijkgrafiek bij nodig hebben lijkt me 8-[

Raspoetin

Dat hangt er vanaf. Je kan het gehalte parabenen berekenen als een percentage van het totale piekoppervlakte in het chromatogram. Echter, als je analytisch correct bezig wilt zijn, dan zul je een standaard mee moeten nemen, en het liefst twee (en dan nog het liefst van verschillende concentratie).

Als je gehalte parabenen 2,25% (ik noem maar wat) bedraagt, zorg dan dat je standaarden hebt van 2,00 en 2,50 % (of daaromtrent), zodat je een mini-ijklijn hebt. Aan de hand van de verhouding tussen de area's van monster en standaard kun je de concentratie in het monster uitrekenen. Hou wel rekening met verdunningsfactoren.

De eenheid waarin de area's zijn gegeven is totaal niet interesssant, zolang je voor de berekening maar dezelfde eenheden voor monster en standaard oppervlaktes aanhoudt.

Napoleon1981

Dat hangt er vanaf. Je kan het gehalte parabenen berekenen als een percentage van het totale piekoppervlakte in het chromatogram.

Dit is echt onzin! Ik ga even uit van een UV detector. Wat als je compound bij 350nm absorbeerd en je een mega verontreiniging hebt op bijvoorbeeld 254nm en dat niet weet. Dus je meet lekker op 350nm en mist die compound compleet, hij wordt dus niet geintergreerd en dus genegeerd!

De enige juiste manier is zoals FsWd al zegt, een calibratie curve! Ook die interne standaarden waar Raspoetin op doelt is hier niet geschikt voor. Het absolute minimum voor een calibratie curve is 3 punten.

Raspoetin

Ik ging in mijn uitleg uit van een getoetste methode. Dus neem ik aan dat er in ieder geval gekeken is bij welke golflengte de parabenen absorberen. En bij nader inzien is inderdaad mijn omschrijving om het gehalte te berekenen als oppervlaktepercentage wat minder gelukkig.

Maar als je uitgaat van een zuivere piek, dan lijken mij twee standaarden (die het monster wua concentratie benaderen) genoeg.

Napoleon1981

Je meet inderdaad in het absorptie maximum van de parabenen normaal gesproken. Nu kun je dus andere componenten missen met een ander absorptie maximum en dus zegt piekoppervlakte relatief van elkaar in dit geval dus niks. Je kunt nooit uitgaan van een zuiverpiek en al helemaal niet in een shampoo monster waar allerlei extracten in zitten. Die piekoppervlakte methode is niet ongelukkig, dit is gewoon incorrect! De reden dat ik hier zo op doorhamer is dat ik er bang voor ben dat iemand dit gelooft sorry.

2 standaarden is niet genoeg. Waarom dit niet genoeg is staat in ieder goed statistiekboek vermeldt. Ik ga hier dus niet over in discussie, zoek het eerst maar eens in een boek op wat de gevolgen zijn voor het aantal vrijheidsgraden etc.

citrobacter

parabenen absorberen bij 254 nm (uv), en ik heb twee afzonderlijke standaarden gemaakt. Wat is er precies weergegeven op x en y as van een callibratiecurve?

Fuzzwood

X-as, concentratie. Y-as in dit geval het piekoppervlak. Een ezelsbruggetje: x is wat je weet en y is wat je meet.

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

rp-18 hplc

rp-18 hplc

Re: rp-18 hplc

Re: rp-18 hplc

Re: rp-18 hplc

Re: rp-18 hplc

Re: rp-18 hplc

Re: rp-18 hplc

Re: rp-18 hplc