Springen naar inhoud

HPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

dreunie

    dreunie


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 november 2005 - 09:51

Hello,

Ik heb een vraag over HPLC... ik heb een aantal oefententamens en hierin wordt gevraagd wat er gebeurt met de piekbreedte, piekhoogte en piekoppervlak als de flow 2x zo groot wordt. Als antwoord wordt hier gegeven dat de piekbreedte kleiner wordt, de piekhoogte hetzelfde blijft en het piekoppervlak ook kleiner wordt. Ik begrijp dit niet.. de concentratie blijft toch hetzelfde, dan moet het piekoppervlak toch ook hetzelfde blijven. Ik snap dat de piek smaller wordt maar dan moet de hoogte toch groter worden?? :) kan iemand mij hiermee helpen??

Alvast bedankt..

Pleun

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 03 november 2005 - 10:19

Hoe hoger de flow, hoe sneller een component door de detector stroomt. Hij is dus eerder uit de detector. Dit levert een smallere piek op. Aangezien de concentratie wel hetzelfde blijft, is de absortpie in je (UV)-detector even groot. De piekhoogte zal niet veel veranderen.

Dus verhoging flow is versmalling piekbreedte (als flow 2x zo hoog wordt, hoe smaller denk je dat de pieken worden?). Als PiekBr veranderd, en PiekHo hetzelfde blijft, wat denk je dan dat er met het piekoppervlakt gebeurt?
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#3

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 november 2005 - 17:02

Eerst even wat over de flowrate verhoging:

Dit is zeer gecompliceerd en niet zo simpel als raspoetin hier voordoet. Een kolom heeft een optimale flowrate, wanneer je hier boven gaat zitten verlies je heel snel schotels wat resulteerd in bredere pieken. Waarschijnlijk doelen ze hier op 2x zo klein, maar werkelijk zal dat veel minder efficient zijn. Ik ga dit niet helemaal beschrijven, maar mocht je geintresseerd zijn dan moet je zoeken op "van deemter" curves.

Je vraag:

Ik vind je vraag een hele goede, ik moest er zelf eerst ook even over nadenken, want je zou inderdaad verwachten dat piekoppervlakte (een maat voor de concentratie) niet zou veranderen omdat je sample het zelfde is. Het ware antwoord ligt hem in de UV detectie hoe werkt dit. Is deze concentratie of massa afhankelijk? Wat denk je dat er gebeurd wanneer je analiet de detector passeerd (is de concentratie verandert?).

Kom je er nu uit?

#4

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 03 november 2005 - 17:30

Napoleon1981 heeft inderdaad gelijk. In de praktijk zal de situatie zoals ik die schets niet exact voorkomen. Je hebt te maken met je H/u curve, waarin een minimum voorkomt. Dit minimum is de kleinste schotelhoogte (dus max aantal schotels) en komt maar bij 1 flow voor. Wat Naoplen1981 bedoelt is dat wanneer je de flow verdubbeld, je in een ander gebied van je H/u curve gaat werken en je scheiding niet meer optimaal is, wat weer tot gevolg heeft dat je piekvormen niet zo mooi overeenkomen als ik deed voorkomen. Echter, gezien je niveau (4) en gezien de vraagstellling (ik neem aan dat je de vraag hier goed hebt weergegeven en geen gegevens vergeten hebt te posten) en het antwoord denk ik dat de leraar genoegen neemt met de reactie inmijn eerste post.
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#5

dreunie

    dreunie


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 november 2005 - 09:08

Ik snap hem nog steeds niet helemaal. Ik snap dat de hoogte hetzelfde blijft en de piek smaller wordt, maar dan wordt de piekoppervlak kleiner (volgens het antwoord) en dan zou toch de concentratie kleiner worden... wat niet het geval is. Volgens mij is UV toch concentratie afhankelijk? Hogere concentratie geeft grotere absorptie?! Hoe meer deeltjes voor de detector, hoe meer UV ze absorberen.
Ik kom er nog niet helemaal uit...

#6

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 04 november 2005 - 09:27

Als je een component hebt waarvan de absorptie in een gewone UV spectrofotometer 0.800 is, en je geleid deze component met dezelfde concentratie door een HPLC, dan zal de maximale absortpie nog steeds 0.800* zijn toch? Als mijn flow dan verlaagd wordt tot een factor twee, dan kan mijn absorptie toch geen 1.600 worden? De concentratie veranderd immers niet. Wat wel veranderd is dat mijn piekbreedte twee maal zo groot wordt (zonder rekening te houden met mijn H/u curve).
Deze toename in piekbreedte komt doordat mijn component twee keer zo lang in de detector heeft gezeten. Piekbreedte wordt ook altijd weergegeven in seconden (of minuten).

*Hierbij moet opgemerkt worden dat een HPLC detector meestal data genereert in milliVolt en niet in absorptieeenheden
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#7

dreunie

    dreunie


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 november 2005 - 09:34

Okey, heb m denk ik door... tnx voor reageren!

#8

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 november 2005 - 16:07

Je piek oppervlak word inderdaad kleiner, maar je calibreerd ook op deze flowrate, dus je standaarden zijn ook kleiner :)





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures