Springen naar inhoud

parameters


  • Log in om te kunnen reageren

#1

salsa

    salsa


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 november 2005 - 10:54

Hallo,

Ik ben an het studeren hPLC chromatografie. Er zijn en paar dinhen mij niet helemaal duidelijk.

Er zijn twee elutiemethode mogelijk bij HPCL. Gradient en Isocratische.


Van een monster met een complexe matrix moet een component isocratisch gescheiden worden. Aan welke parameters moet de piek voldoen zodat de isocratische scheiding gelukt is?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 november 2005 - 11:25

Je piekvorm moet in ieder geval een zekere mate van symmetrie hebben. En of je weet hoe dat je scheiding gelukt is, weet je pas zeker als je ook weet hoeveel componenten in je monster zitten. Als je 4 componenten hebt, is de scheiding pas gelukt als je 4 afzonderlijke pieken hebt. Als je 3 pieken ziet, zou het kunnen zijn dat twee pieken precies over elkaar heen vallen, of dat één component helemaal niet van je kolom afkomt.
Gradiënt wordt gebruikt om de polariteit van de MF te veranderen tijdens een analyse, zodat componenten die met MF A op de kolom blijven, wel elueren zodra MF B over de kolom wordt geleidt. Als je een zeer compolexe matrix hebt, is het vaak beter om je monster eerst te bewerken zodat je de te meten component uit je monster isoleert. Dan vervuil je je kolom niet te erg.
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#3

salsa

    salsa


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 november 2005 - 12:24

Hallo Rasputin,


Je piekvorm moet in ieder geval een zekere mate van symmetrie hebben.


Hoe kan je de mate van symetrie bepalen? Op het oog misschien of moet het aan een bepaalde waarde voldoen?

En of je weet hoe dat je scheiding gelukt is, weet je pas zeker als je ook weet hoeveel componenten in je monster zitten. Als je 4 componenten hebt, is de scheiding pas gelukt als je 4 afzonderlijke pieken hebt. Als je 3 pieken ziet, zou het kunnen zijn dat twee pieken precies over elkaar heen vallen, of dat één component helemaal niet van je kolom afkomt


Het is niet bekend uit hoeveel componenten het monster bestaat. Bekend is dat 1 component bepaald moet worden.

Als je een zeer compolexe matrix hebt, is het vaak beter om je monster eerst te bewerken zodat je de te meten component uit je monster isoleert.


Materiaal om de component te isolieren is niet beschikbaar.

Wat voor mogelijkheden nog zijn er meer?

Veranderd door salsa, 10 november 2005 - 12:30


#4

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 november 2005 - 12:40

Vertel eerst eens even welke component je waarin wilt bepalen en hoe ver dat je al bent gekomen. HPLC is zeer breed, dus enige specificering zou helpen
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#5

salsa

    salsa


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 november 2005 - 13:11

Mijn eigenlijke vraag is. of er parameters zijn waaraan een isocratische scheiding moet voldoen om te kunnen concluderen dat een componet d.mv. een isocratiesche analyse gescheiden kan worden.

Welke parameters zijn dat?

#6

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 november 2005 - 13:28

Er is niet een algemene specificatie. Elke bepaling met HPLC heeft zijn eigen instellingen qua mobiele fase, flowsnelheid, kolomtemperatuur etc. Elke piekvorm is ook anders bij andere instellingen. Je kan niet zeggen dat bij elke HPLC analyse je eisen precies hetzelfde moeten zijn, dat is onmogelijk. Een symmetrische piek (gaussische vorm) houdt in dat de verdeling tussen je SF en MF optimaal is geweest. Als dit niet zo is (en vaak voorkomt) krijg je tailing. Dat houdt in dat je piek "nasleept". Berekening zie onder.
Geplaatste afbeelding

Veranderd door Raspoetin, 10 november 2005 - 14:54

I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#7

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 november 2005 - 14:47

Een belangrijke parameter is natuurlijk dat de resolutie tussen de analytpiek en de naburige andere pieken voldoende moet zijn. De resolutie Rs moet minstens 1,5 zijn, en meestal ook niet veel meer, om tijd te besparen.

Ik begin meestal aan een dergelijk probleem door een reeks chromatogrammen op te nemen met een dalend % organische modifier, dus: 100 % org; dan 80%, dan 60% dan 40%

Hierbij moet je natuurlijk wel weten welke van de (vele) pieken het analyt is. Dit kan je te weten komen door het UV spectrum te bekijken als je een PDA hebt, of desnoods door vergelijking van injectief van de standaard met dezelfde percentages organische modifier.

Isocratische analyse is mogelijk wanneer de range in retentiefactoren k' ligt tussen 1 en 20. Als die range groter is moet je in elk geval gradiëntelutie gebruiken.

#8

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 november 2005 - 14:53

Ja dat klopt, maar je hoofcomponent kan samenvallen met een bijprodukt. Je peak purity is dan zeer laag. Hoe weet de TS of haar hoofdcomponent piek zuiver is? Daarvoor zul je toch richting MS moeten gaan denken. Maar andere eisen zoals schotelgetal of signaal ruis verhouding zijn zeer methode afhankelijk.
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#9

salsa

    salsa


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 november 2005 - 14:59

wat is TS?

Veranderd door salsa, 10 november 2005 - 15:27


#10

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 10 november 2005 - 15:28

Oh, sorry: Topic Starter, jij dus :)
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#11

salsa

    salsa


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 10 november 2005 - 15:41

Oooohh :) ,

Voor het berekenen van de kapciteit factor is de retentie tijd van de onvertraagde component nodig.

Welke piek kan ik als onvertraagde component gebruiken als de eerste gedetecteerde piek die niet als piek te zien is en de eerste duidelijk zichtbare piek niet basislijn gescheiden is?

Bij de piekintegratie wordt de eerste zichtbare piekt is niet basislijn gescheiden maar wordt wel als afzonderlijke piek gezien zien.
Kan deze piek als onvertraagde component dienen?
Wat als de retentietijd van die piek bij elke injectie, bij dezelfde vehouding stoffen in het eluens, totaal anders is?

Groetjes ,
salsa

Veranderd door salsa, 10 november 2005 - 15:50


#12

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 11 november 2005 - 05:40

Een onvertraagde component is NIET de eerste piek. Je zult moeten kijken of je toevallig een solvent front ziet (een injectie piek) ergens rond 1 minuut. Bij UV detectie zie je vaak een negatievepiek gevolgd door een positieve piek of vice versa.
Voor het bepalen van de van de dodetijd gebruikt men meestal een oplossing met uracil.

Verder gebruikt men de K waarde om aantegeven hoever een component gescheiden is van het dodevolume, basislijn scheiding is totaal niet van belang bij het bepalen van dodetijd.

Over het veranderen van retentie tijd kan ik het volgende zeggen. Retentietijd is niet iets dat zomaar veranderd. Dit is echt een eigenschap van een stof op dat systeem. Grootheden als temperatuur hebben hier wel een invloed op, maar als alles constant blijft, dan blijft de retentietijd ook gelijk en wordt niet plots anders.

Wat opmerkingen over teksten geschreven in dit topic:
De piek symetrie kun je berekenen door de SKEW van de piek te berekenen. Dit staat gelijk aan de 3e afgeleide als ik me niet vergis. negatieve skew waarden duiden op een fronting peak en positieve waarden op een tailing piek.

Een opmerking van raspoetin was dat als je 4 componenten hebt, je scheiding pas gelukt is als je vier gescheiden pieken hebt. Dit is natuurlijk alleen waar als je in de 4 afzonderlijke pieken geintresseerd bent. Als je er maar in 1 geintresseerd bent, dan probeer je alleen deze te scheiden.

Zoals jooken zegt gebruik je een gradient om je chromatogram in elkaar te drukken. Wanneer je een mengsel van componenten hebt en een aantal komen zeer makkelijk van de kolom en een aantal zeer moeilijk, dan zul je een gradient moeten gaan gebruiken. Als je namelijk begint met een hoge concentratie modifier dan vliegen je componenten met een lage retentie factor onvertraagd door de kolom en verdwijnen in het dode volume. Wanneer je een lage concentratie modifier gebruikt zul je de sterk vertraagde componenten niet van de kolom krijgen. Wanneer je een gradient gaat gebruiken zul je wel een pomp moeten hebben die dit kan :)

#13

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 11 november 2005 - 08:32

Voor het bepalen van de van de dodetijd gebruikt men meestal een oplossing met uracil.

Klopt, maar als je geen uracil hebt, is een oplossing van natriumnitraat ook geschikt om t0 te berekenen.
Ook nog een tip: een injectiepiek ziet er meestal uit als zo'n hartslag op zo'n hartslagbewakingsmonitor, dwz hij schiet boven de basislijn, dan duikt hij er meteen weer onder en dan weer op hetzelfde niveau als de basislijn. Voorbeeldje hieronder geprobeerd:

-----^V-----
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#14

salsa

    salsa


  • 0 - 25 berichten
  • 10 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 11 november 2005 - 09:37

De gebruikte kolom is een RP kolom (C18). De mobiele fase bestaat uit acetonitrile (24%), water (74%) en (2% (v/v) 0,1 N sterkzuur. (even een vraagje tussen door. Is N (normaal) hetzelfde als c (concentratie in mol/l) ?) Het oplosmiddel van het monster is methanol.

Kan ik dan de Tr bepalen zowel met uracil als met natriumnitraat?

Is het een kwestie van bijvoorbeeld 3 mg stof (uracil/natriumnitraat) oplossen in 10.00 ml methanol en dan injecteren?
Wat is de beste methode om zo'n experiment aante pakken pakken.

Als nu er geen mogelijkheid meer is om experimenten uit te voeren hoe kan ik de Tr bepalen om toch nog de kapacitetsfactor van de piek te kunnen berekenen?[/SUB]

Veranderd door salsa, 11 november 2005 - 10:03


#15

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 11 november 2005 - 13:51

De N staat in dit geval dacht ik (sla me als ik het fout heb) voor het aantal mol H+ die vrijkomt (H3O+), voorbeeld: heb je 1 mol HCl, dan heb je ook 1 N HCl. Heb 1 mol zwavelzuur dan heb je volgens mij 2N zwavelzuur.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures