Springen naar inhoud

SDS-PAGE


  • Log in om te kunnen reageren

#1

seth_CF

    seth_CF


  • >25 berichten
  • 62 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 november 2005 - 14:29

weet er iemand waarom men,direct na toegevoegen van een 7,5% of 12% scheidingsgel,men een paar druppels water toevoegt bovenop het gel?

THX


Seth

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 17 november 2005 - 14:52

De reden zou zijn het afsluiten van de lucht zodat de zuurstof uit de lucht de polymerisatie niet belemmert. Ook het ontgassen van het mengsel van water,TRIS,SDS en Acrylamide/BIS onder vacuum gebeurt om deze reden.

Gerard

Veranderd door Gerard, 17 november 2005 - 14:52


#3

seth_CF

    seth_CF


  • >25 berichten
  • 62 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 november 2005 - 15:07

ik snap het....bedankt!!

#4

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 17 november 2005 - 16:43

(topic even verplaatst)

men een paar druppels water toevoegt bovenop het gel?


Huh?


Maar het water mengt toch met de polymeriserende gel? Naar mijn weten gebruik je hiervoor 1-butanol. Bovendien wordt hierdoor je grensvlak tussen stack en run gel mooi recht, dat is wel zo handig)

#5

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 17 november 2005 - 16:58

Gideon,

Het water mengt in de praktijk niet, waarschijnlijk doordat de polymerisatie al op gang is gekomen, voor het gebruik van isopropanol wordt in mijn handboek van Reiner Westermeijer een 60% v/v opgegeven.

Ik heb bij het gieten van de gel een mooie recht grensvlak, maar dat heeft waarschijnlijk ook te maken met de snelheid van handelen.

Ik zou geen voorkeur durven uit spreken voor een van beide methoden, vaak is het een kwestie van wat je gewend bent.

Gerard

#6

Hovinsj1

    Hovinsj1


  • >100 berichten
  • 125 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 november 2005 - 10:23

"Het water mengt in de praktijk niet, waarschijnlijk doordat de polymerisatie al op gang is gekomen, voor het gebruik van isopropanol wordt in mijn handboek van Reiner Westermeijer een 60% v/v opgegeven."

Huh... het water mengt niet, omdat de acrylamide oplossing een veel hogere dichtheid heeft dan water. Maar voeg het water maar eens onvoorzichtig toe, dan mengt het fantastisch.

Over het algemeen wordt inderdaad butanol toegevoegd (het liefst verzadigd in de Tris buffer) om 1) zuurstof af te sluiten dat de polymerisatie remt en 2) een mooi recht front te krijgen van de gel.

Voor zover ik Reiner ken, voegt hij ook verzadigde butanol toe. Hoewel, de laatste trend is om een 0.1% SDS oplossing met een plantenspuit (!) te vernevelen boven de geloplossing (vooral bij 2-D gelen, waarbij meestal gelijk 24 grote gelen gegoten worden). Dit levert een zeer recht front op.

Maar ik dacht, dat in NL geen gels meer zelf gegoten worden mogen... klopt dit?

Sjouke

#7

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 21 november 2005 - 11:03

Maar ik dacht, dat in NL geen gels meer zelf gegoten worden mogen... klopt dit?


Bedoel je dit in het algemeen of alleen met SDS-PAGE?
Ik heb nog verscheidende keren gelen maken om de RNA kwaliteit te analyseren in het UMCG.
Dit was een agarose gel met ethidiumbromide.

Tijdens mijn studie hebben we een kant en klaar gel gebruikt voor de SDS-PAGE.

MvG Ron

Veranderd door biochemiefreak, 21 november 2005 - 11:05


#8

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 21 november 2005 - 11:51

Sjouke

bedankt voor je oplossing van het mengprobleem, ik had niet aan de dichtheid gedacht.

Het gieten van PAG-gels is niet direct verboden, maar op grond van de ARBO-wet die een verplichting oplegt om de risico's zover mogelijk te minimaliseren is dit voor routinewerkzaamheden wel de praktijk.
Ik giet zelf nog enkele keren per jaar een gel en gebruik daarvoor een 30% Acrylamide/Bis oplossing voor en geen poedervormig acrylamide.

Gerard





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures