Springen naar inhoud

Subtractie kloneren


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Trijn

    Trijn


  • 0 - 25 berichten
  • 24 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 december 2005 - 14:42

Hey,
Na enkele uren te hebben gezwoegd op het subtractie kloneren, is me er niet veel duidelijker gevonden. Kan er me dat eens iemand uitleggen aub.

Het is gelinkt met de positie-onafhankelijke strategiŽn om ziektegenen te identificeren

Thx
K.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 december 2005 - 17:47

Het ligt misschien aan mij maar ik snap niet goed wat je bedoeld. Wat bedoel je? :)

#3

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 01 december 2005 - 17:57

Zou je er misschien wat meer informatie bij beschaffen?
Welke technieken heb je gebruikt?
Wat zijn jouw struikelpunten/ waar loop je vast?
Wat wil je weten? Puur de theorie of ook praktische vaardigheden?

Het is gelinkt met de positie-onafhankelijke strategiŽn om ziektegenen te identificeren


Welke methode wordt hier op toegepast?

MvG Ron

#4

Trijn

    Trijn


  • 0 - 25 berichten
  • 24 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 december 2005 - 14:52

Zoals ik al zei: is het een techniek die gebruikt wordt voor de identificatie van ziektegenen.

Meerbepaald een techniek die dient om verschillende klonen te selecteren die coderen voor DNA dat gedeleteerd is in een individu met een chromosomale deletie.
Bij deze techniek vertrekt men van 2 verschillende celpopulaties:
- normale cellen
- kanker cellen

Het is nu de bedoeling om te weten te komen welke genen bij de kankercellen (en niet in de normale cellen) tot expressie komen.

Die basisprincipes heb ik wel onder de knie, maar de juiste werkwijze heb ik niet beet.
Ik weet dat je eerst de mRNA uit de beide cellen moet isoleren en die dan omzetten tot dsDNA, waarbij we dan beschikken over Tester DNA (van normale cellen) en Driver DNA (van de kankercellen) .

Dan gaan we die beide populaties gaan verknippen (RSA verknipping) en worden er adaptors vastgekoppeld. Bij het vervolg van de procedure sla ik in de knoop.

Wie me kan helpen, graag...
Gr. K

#5

Trijn

    Trijn


  • 0 - 25 berichten
  • 24 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 07 december 2005 - 13:06

Niemand die me een beetje kan helpen?

Gr. K

#6

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 07 december 2005 - 13:52

Ik heb deze procedure gedaan met ontstekingsgeassocieerde genen. Hierbij heb ik gekeken naar de genen die tot expressie komen in ontstoken endotheelcellen en deze vergelijken met gezonde endotheelcellen.
Mijn werkwijze was als volgt misschien heb je er wat aan:

Eerste endotheelcellen activeren met een ontstekingscytokinen zoals TNF-α of IL-1 een aantal uren laten staan en dan oogsten.
Vervolgens het RNA isoleren en het RNA omzetten naar cDNA.
Uit de theorie ontstekingsgeassocieerde genen kiezen, in jouw geval angiogenese geassocieerde genen, en met behulp van real-time RT PCR kijken naar de expressie niveaus van deze genen.

Zit dit ook een beetje in jouw richting of zit ik er helemaal naast?

MVG Ron

#7

Trijn

    Trijn


  • 0 - 25 berichten
  • 24 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 03 januari 2006 - 18:39

Voor wie het interesseert, ik heb er een interessante link over gevonden

http://www.clontech....CR-SelectBR.pdf

#8

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 04 januari 2006 - 16:46

Interessant wordt verwerkt bij de links. Ik heb gewoon de link van clontech toegevoerd zodat er nog meer informatie kan worden gegeven.

MvG Ron

Veranderd door biochemiefreak, 04 januari 2006 - 16:51






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures