Hey,
Na enkele uren te hebben gezwoegd op het subtractie kloneren, is me er niet veel duidelijker gevonden. Kan er me dat eens iemand uitleggen aub.
Het is gelinkt met de positie-onafhankelijke strategiën om ziektegenen te identificeren
Thx
K.
Laatste berichten
-
13:57
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
13:16
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
13:12
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
12:01
Gravity and gravitation 1
-
10:15
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
09:54
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 6
-
23:07
Rood laserlicht 2
-
15:28
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
-
23 apr
Weerfrustratie 9
-
23 apr
Kunnen quantum Zonnecellen 190% quantum efficiënt zijn 3
-
23 apr
De Euro Nederlandse 100 qubit computer komt eraan
-
23 apr
projectiel 8
-
23 apr
Verschil tussen deze 2 vragen 5
-
23 apr
[scheikunde] berekeningen labo vitamine c bepaling 1
-
22 apr
[wiskunde] rode en witte ballen verdelen 8
-
22 apr
Rotatie van het heelal 41
-
22 apr
Muntje opgooien 14
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Subtractie kloneren
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 337
Re: Subtractie kloneren
Het ligt misschien aan mij maar ik snap niet goed wat je bedoeld. Wat bedoel je? 
-
- Berichten: 2.330
Re: Subtractie kloneren
Zou je er misschien wat meer informatie bij beschaffen?
Welke technieken heb je gebruikt?
Wat zijn jouw struikelpunten/ waar loop je vast?
Wat wil je weten? Puur de theorie of ook praktische vaardigheden?
MvG Ron
Welke technieken heb je gebruikt?
Wat zijn jouw struikelpunten/ waar loop je vast?
Wat wil je weten? Puur de theorie of ook praktische vaardigheden?
Welke methode wordt hier op toegepast?Het is gelinkt met de positie-onafhankelijke strategiën om ziektegenen te identificeren
MvG Ron
-
- Berichten: 24
Re: Subtractie kloneren
Zoals ik al zei: is het een techniek die gebruikt wordt voor de identificatie van ziektegenen.
Meerbepaald een techniek die dient om verschillende klonen te selecteren die coderen voor DNA dat gedeleteerd is in een individu met een chromosomale deletie.
Bij deze techniek vertrekt men van 2 verschillende celpopulaties:
- normale cellen
- kanker cellen
Het is nu de bedoeling om te weten te komen welke genen bij de kankercellen (en niet in de normale cellen) tot expressie komen.
Die basisprincipes heb ik wel onder de knie, maar de juiste werkwijze heb ik niet beet.
Ik weet dat je eerst de mRNA uit de beide cellen moet isoleren en die dan omzetten tot dsDNA, waarbij we dan beschikken over Tester DNA (van normale cellen) en Driver DNA (van de kankercellen) .
Dan gaan we die beide populaties gaan verknippen (RSA verknipping) en worden er adaptors vastgekoppeld. Bij het vervolg van de procedure sla ik in de knoop.
Wie me kan helpen, graag...
Gr. K
Meerbepaald een techniek die dient om verschillende klonen te selecteren die coderen voor DNA dat gedeleteerd is in een individu met een chromosomale deletie.
Bij deze techniek vertrekt men van 2 verschillende celpopulaties:
- normale cellen
- kanker cellen
Het is nu de bedoeling om te weten te komen welke genen bij de kankercellen (en niet in de normale cellen) tot expressie komen.
Die basisprincipes heb ik wel onder de knie, maar de juiste werkwijze heb ik niet beet.
Ik weet dat je eerst de mRNA uit de beide cellen moet isoleren en die dan omzetten tot dsDNA, waarbij we dan beschikken over Tester DNA (van normale cellen) en Driver DNA (van de kankercellen) .
Dan gaan we die beide populaties gaan verknippen (RSA verknipping) en worden er adaptors vastgekoppeld. Bij het vervolg van de procedure sla ik in de knoop.
Wie me kan helpen, graag...
Gr. K
-
- Berichten: 2.330
Re: Subtractie kloneren
Ik heb deze procedure gedaan met ontstekingsgeassocieerde genen. Hierbij heb ik gekeken naar de genen die tot expressie komen in ontstoken endotheelcellen en deze vergelijken met gezonde endotheelcellen.
Mijn werkwijze was als volgt misschien heb je er wat aan:
Eerste endotheelcellen activeren met een ontstekingscytokinen zoals TNF-α of IL-1 een aantal uren laten staan en dan oogsten.
Vervolgens het RNA isoleren en het RNA omzetten naar cDNA.
Uit de theorie ontstekingsgeassocieerde genen kiezen, in jouw geval angiogenese geassocieerde genen, en met behulp van real-time RT PCR kijken naar de expressie niveaus van deze genen.
Zit dit ook een beetje in jouw richting of zit ik er helemaal naast?
MVG Ron
Mijn werkwijze was als volgt misschien heb je er wat aan:
Eerste endotheelcellen activeren met een ontstekingscytokinen zoals TNF-α of IL-1 een aantal uren laten staan en dan oogsten.
Vervolgens het RNA isoleren en het RNA omzetten naar cDNA.
Uit de theorie ontstekingsgeassocieerde genen kiezen, in jouw geval angiogenese geassocieerde genen, en met behulp van real-time RT PCR kijken naar de expressie niveaus van deze genen.
Zit dit ook een beetje in jouw richting of zit ik er helemaal naast?
MVG Ron
-
- Berichten: 24
Re: Subtractie kloneren
Voor wie het interesseert, ik heb er een interessante link over gevonden
http://www.clontech.com/clontech/products/...CR-SelectBR.pdf
http://www.clontech.com/clontech/products/...CR-SelectBR.pdf
-
- Berichten: 2.330
Re: Subtractie kloneren
Interessant wordt verwerkt bij de links. Ik heb gewoon de link van clontech toegevoerd zodat er nog meer informatie kan worden gegeven.
MvG Ron
MvG Ron
