Springen naar inhoud

HPLC kolommen


  • Log in om te kunnen reageren

#1

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 06 december 2005 - 21:25

Hallo,

Ik heb navraag gedaan hoe je kolommen in principe op moet slaan, conserveren. Nu blijkt dat we in het verleden dit niet precies volgens de regels hebben gedaan.
Als we nu de kolommen willen spoelen hoe doe je dit en wat zijn de risico's.
We hebben drie soorten kolommen in gebruik. De nova pack C18, de symmetry C8 en de symmetry Shield C18.

Wie kan hierover iets vertellen??

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

mmaarr

    mmaarr


  • >100 berichten
  • 184 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 06 december 2005 - 22:35

Opslaan van kolommen:

- bij gebruik van een buffer als eluent spoelen met water/organisch.
- bij gebruik van een organisch eluent, langzaam spoelen overgaan naar water/organisch.

eventueel spoelen met respectievelijk zuiver water of zuiver organisch, of beiden om alle polaire en apolaire resten er vanaf te spoelen.
Als laatste spoelen met 50/50 water/organisch. De kolom "nat" en afgesloten opbergen.

#3

jb31dec

    jb31dec


  • >100 berichten
  • 238 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 07 december 2005 - 14:45

geef de volgende keer meer uitleg!! Geplaatste afbeelding :)
wat is

niet precies volgens de regels

????
Verkeerd eluens als spoelstap?
Niet dichtgeschroefd?
etc
Jouw C-8/C-18 kolommen zijn mijns inziens te spoelen met water methanol.
Dit is gebruikelijk (meestal 50:50 ofzo)

mmaarr,
wat bedoel je met:

- bij gebruik van een buffer als eluent spoelen met water/organisch.
- bij gebruik van een organisch eluent, langzaam spoelen overgaan naar water/organisch.


Met een buffer moet je erg voorzichtig zijn met de hoeveelheid organisch oplosmiddel!! Zeker Acetonitril kan dan funest zijn, omdat daarin je zouten uitkristalliseren.
Ik zou na een buffer spoelen met water : methanol 80 : 20 en langzaam de methanol omhoog brengen tot 50% ofzo.
Water methanol wordt veel gebruikt bij opslag van RP kolommen.

#4

jb31dec

    jb31dec


  • >100 berichten
  • 238 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 07 december 2005 - 14:45

PS: water methanol alleen bij LAGE flow gebruiken ivm HOGE druk!

#5

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 07 december 2005 - 23:06

niet precies volgens de regels


Hiermee bedoelde ik dat de kolommen gewoon opgeborgen werden in het eluens, dus met de evt. aanwezige buffer.

Dus je mag de kolommen met 100% HPLC water spoelen, Mij is namelijk verteld dat dit niet zonder risico is!!


Als je de spoelingen gedaan hebt . Hoe kun je dan controleren of dit goed verlopen is?? Of begin je gewoon te analysren en kijk je hoe dit gaat?

In ieder geval al bedankt voor bovenstaande reacties.

Groetjes

#6

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 december 2005 - 08:13

Dus je mag de kolommen met 100% HPLC water spoelen, Mij is namelijk verteld dat dit niet zonder risico is!!


Ja je hebt gedeeltelijk gelijk. C18 staarten kunnen samenklonteren in 100% water. Dit gebeurt altijd eigenlijk. Wil je daarna weer meten, moet je eerst je kolom reconditioneren. Dus ja je mag 100% water gebruiken, als je daarna weer reconditioneerd.

Als je de spoelingen gedaan hebt . Hoe kun je dan controleren of dit goed verlopen is?? Of begin je gewoon te analysren en kijk je hoe dit gaat?


Wat je kan doen zijn 2 dingen. Je had het over een verontreiniging op de kolom. Ik neem aan dat je dit in een detector hebt gezien. Je kan tijdens het spoelen je kolom aan de detector vast maken en je ziet je basis lijn minder worden naarmate er meer verontreiniging uit je kolom is. 100% schoon worden zal waarschijnlijk niet lukken, dus een basis lijn van 0 zal je niet krijgen.

In ieder geval al bedankt voor bovenstaande reacties.

Daar zijn we voor :)

succes ermee

#7

jb31dec

    jb31dec


  • >100 berichten
  • 238 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 december 2005 - 20:50

NEE!
ik heb helemaal niet gezegd dat je kolommen mag spoelen met 100% water!!
niet doen is mijn advies!
water METHANOL mengsel gebruiken!
zeker voor opslag.

die buffer van je heeft de kolom vrijwel zeker aangetast, maar het hoeft niet dermate erg te zijn dat je kolom definitief kapot is.
eerst goed spoelen, dan vervolgens inderdaad de basislijn bekijken, maar pas nadat je minstens een half uur (beter = langer) hebt gespoeld bij constante flow. Hierna injecteer je je standaarden en check je de lineariteit.
Het beste kun je de standaarden meteen vergelijken met eerder gemeten waarden en als hoogte, retentietijd en area goed overeenkomen is er niets aan de hand.

#8

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 december 2005 - 21:42

Ja je hebt gedeeltelijk gelijk. C18 staarten kunnen samenklonteren in 100% water. Dit gebeurt altijd eigenlijk. Wil je daarna weer meten, moet je eerst je kolom reconditioneren. Dus ja je mag 100% water gebruiken, als je daarna weer reconditioneerd


Dat reconditioneren war houd dat in??

#9

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 december 2005 - 21:48

In een boekje wat zit bij een nieuwe kolom wordt gesproken over spoelen met water van 18 megaohm.

Wat voor water is dat?????????

#10

Roytje

    Roytje


  • >250 berichten
  • 328 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 08 december 2005 - 22:00

MilliQ water, zit nog minder zooi in als demi water.

Dat reconditioneren war houd dat in??

Dan zorg je er weer voor dat die C18 staarten los van elkaar komen.

Veranderd door Roytje, 08 december 2005 - 22:02


#11

harriel

    harriel


  • >100 berichten
  • 130 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 08 december 2005 - 23:34

Hoe doe je dat??
Ik ben erg benieuwt!

#12

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 09 december 2005 - 13:14

Door te spoelen met 50-50 MeOH-H2O





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures