Wetenschapsforum

hallo,

we hebben net een isolatie van chromosomaal DNA uit bloed uitgevoerd.

Maar wat ik niet begrijp is dat men de concentratie van het DNA moet bepalen met een factor:

Extinctie bij 260 nm moet vermenigbuldigd worden met factor 3,8.

Zo krijgt men de [DNA] in µg/µL.

Weet iemand hoe men aan die 3,8 komt??

bedankt!!!

vreemd ja, ik heb een heel ander getal bebruikt voor de kwantiteit meting, ik weet alleen niet meer precies welk getal dit was...

Ik heb echt geen idee. Ik gebruikte altijd een nanodrop en die software rekende het voor mij uit.

MvG Ron

Vind dat niet zijn oorsprong in de extinctie coefficent en wat verdunningen?

de factor kan natuurlijk ook voor alleen bloed zijn, voor mijn sequentie analyse heb ik andere getallen, maar die gebruik ik eigelijk nooit omdat de kwantiteit vrijwel altijd bekend is.

Ligt er maar net aan wat je doelstellingen zijn. Wil je deze waarden zeer nauwkeurig hebben voor de gen expressie bepalen van bepaalde cellen (endotheel, monocyten, etc) dan is de kwantitatieve bepaling van het DNA/RNA matieraal wel belangrijk.

Bloed is trouwens wel een heel ruim begrip. In rode bloedcellen zit geen kern dus richt je je op de leukocyten en deze zou je er nog uit kunnen halen en scheiden van het serum.

MvG Ron

het komt er op neer dat je moet wéten wat je doet! niet zo maar vermenigvuldigen met factoren in de hoop dat er een juiste waarde uit komt. Volgende keer heb je andere meetomstandigheden, vermenigvuldig je weer met 3,8 en wie zegt je dat je dan de juiste waarden hebt berekend? :eusa_sick:

Grtz Bas

Juist, dus de vraagsteller moet het heleprotocol posten voor wij wat hier over kunnen zeggen. Zoals ik al zeg het heeft gewoon te maken met verdunningen en extinctiecoefficient. In die factor is alles gewoon al uitvermenigvuldigd en daarom hoeft het alleen nog maar met de extinctie coefficient vermenigvuldigd te worden om zo de waarde te verkrijgen.