PCR-klonering

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 152

PCR-klonering

Hallo iedereen!

Is er soms iemand die weet wanneer we eigenlijk gebruik maken van een PCR-reactie en wanneer we iets gaan klonen (of kloneren zoals onze prof altijd zegt...!)? In beide gevallen vermenigvuldig je toch een bepaald gebied uit het DNA van een bepaald organisme. Ik weet wel dat PCR altijd in vitro is (ik dacht dat dit was omdat bijvoorbeeld een bacterie niet overleeft bij die temperatuursverschillen tijdens PCR) en dat klonen in vivo is (door invoeging van plasmiden/bacteriofagen/cosmiden in een bacterie), maar ik weet niet wanneer je wat gebruikt. Amplificatie via PCR lijkt me trouwens ook veel handiger (of is mijn intuiëtie hier verkeerd?).

Ik hoop dat iemand me kan helpen!

Alvast bedankt!

Stef.

Berichten: 337

Re: PCR-klonering

Kloneren is de algemene term voor het maken van insert (bijv met PCR) en een klonerings of expressieconstruct en het maken van een GGO. Klonen slaat in dit geval op een geheel organisme dupliceren (een wel/niet getransformeerde bacterie op een petrischaalbodem noem je een kloon).

Het nadeel van PCR is dat er veel meer fouten worden gemaakt bij de amplificatie, het is veel beter om een plasmide bijv. in vivo te kopieeren. Je krijgt met PCR namelijk geen mooie hele plasmiden, maar een lineaire herhalende sequentie (uh...) van het plasmied. Het polymerase blijft er namelijk rondjes op 'rennen'. Daarnaast is er een veel betere foutcontrole (en worden er dus minder mutaties geintroduceerd) en is het bovendien goedkoop om grote hoeveelheden te krijgen. Het isoleren is ook een eitje (je gebruikt gewoon een mini/maxiprep).

Berichten: 152

Re: PCR-klonering

Slaan de woorden klonen en kloneren dan niet op hetzelfde?

Stef.

Berichten: 337

Re: PCR-klonering

Nee. Klonen is dus het maken van een exacte kopie. Kloneren is een technische term die gebruikt wordt voor het maken van genetisch gemodificeerd organisme.

Berichten: 152

Re: PCR-klonering

Ooooh fijn, weer iets bijgeleerd vandaag!

Bedankt!

Stef.

Berichten: 11

Re: PCR-klonering

Ik moet binnenkort een profiel werkstuk presenteren en het hele verhaal van de PCR reactie etc. is een ingewikkeld voor de leken. De bedoel is dat het zo gepresenteerd word dat ook de alfa-mensen het kunnen begrijpen. Het werkstuk gaat trouwens over DNA-profiling, waarbij gebruik gemaakt word van de PCR reactie met primer mengsel op STR's en er vervolgens een meting aan de concentraties verricht word. Nu komt de vraag, weten jullie ook nog ergens goede animaties van: primer-anealing, PCR en DNA-isolatie te vinden? Het maakt het altijd een stuk tastbaarder dan een droog verhaal.. Alvast bedankt!

Laters, Snowie

Reageer