Springen naar inhoud

omrekenen van Unit/l naar mg


  • Log in om te kunnen reageren

#1

netherlie

    netherlie


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 21:46

Wie kan me helpen. Ik heb een experiment gedaan met glyceraldehyde-3-fosfaat dehyrogenase (GAPDH) proberen te zuiveren uit varkens lever.
Tijdens de zuivering heb ik de enzymactiviteit gemeten. Totale hoeveelheid eiwit m.b.v. de follin lowry en het volume van alle genomen monsters gementen

Nu komt het probleem
Deze wil ik in een zuiveringstabel zetten.
Aan de hand van de enzymactiviteit die ik gemeten heb kan ik berekenen hoeveel units enzym er in me (zoveel) ml monster zit en aan de hand van de hoeveelheid eiwit mg/ml kan ik bereken hoeveel mg eiwit er in me monster zit.

Maar nu nu wil ik weten hoeveel procent GAPDH er in me totaal eiwit zit.
alleen ik het GAPDH in Units en me totaal eiwit in mg dit kan ik toch niet vergelijken.
Kan iemand me helpen hoe ik nu van units naar mg kan komen???????

Hoop dat het een beetje duiderlijk is.

Groetjes
netherlie
De gebruiker voorheen bekend als kolonelvonklink.

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Beryllium

    Beryllium


  • >5k berichten
  • 6314 berichten
  • Minicursusauteur

Geplaatst op 01 februari 2006 - 21:56

Ik weet niet veel van hoe je de eiwitbepaling hebt gedaan, maar ik waag wel een poging:

Je weet het aantal eenheden GAPDH er in een mL zitten. Als je nou de molmassa van GAPDH weet kan je dat toch omrekenen naar mg/mL? Of denk ik nou te simpel?
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

#3

netherlie

    netherlie


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:11

Ik denk waarschijnlijk te moeilijk.

de eenheid waarin ik GAPDH heb ik Units

Units = Ķmol / min

Dus ja dan zou het met de molmassa kunnen.
jeetje heel erg bedank, ik dacht weer is veel te moeilijk :) .
De gebruiker voorheen bekend als kolonelvonklink.

#4

Beryllium

    Beryllium


  • >5k berichten
  • 6314 berichten
  • Minicursusauteur

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:18

Als je er maar mee uitkomt :) graag gedaan.
You can't possibly be a scientist if you mind people thinking that you're a fool. (Douglas Adams)

#5

netherlie

    netherlie


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:20

Alleen de molmassa nog ff te zien achterhalen maar dat gaat helemaal goed komen. :)

thanx
De gebruiker voorheen bekend als kolonelvonklink.

#6

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:29

Ik denk dat je het nu verkeerd begrijpt, 1 unit = is de hoeveelheid enzym die per minuut 1 micromol substaat omzet....
Dit heeft niks met de molmassa van het enzym te maken!

#7

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:34

Stel je hebt een activiteit van 1 mircomol per minuut, en je hebt 10 gram eiwit, dan bevat je eiwit dus 1 unti enzym.
Als je even hieronder je activiteit neerzet (die je had gemeten) dan kunnen we even verder kijken :)

#8

netherlie

    netherlie


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:43

Bij mij eerst monster

volume = 460ml
units/l GAPDH = 18547
In mijn monster zit dus 18547/0,46 = 8532 units

eiwit concentratie - 64,47 mg/ml
totaal eiwit is dus 64,47*460 = 29656 mg

Nu wil ik berekenen hoeveel mg GAPDH ik heb.

Groetjes Nathalie

P.S. thanx voor je reactie
De gebruiker voorheen bekend als kolonelvonklink.

#9

netherlie

    netherlie


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:48

eigenlijk moet ik weten het percentage GAPDH van het totaal eiwit.
Ben al een avond aan het stoeien maar volgens mij denk ik echt veel te moeilijk.
De gebruiker voorheen bekend als kolonelvonklink.

#10

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:59

Je denk te moeilijk, als je kijk naar hoe Roy de definitie geeft dan zie dat een Unit een activiteit weergeeft en geen massa.
Denk eens aan het volgende:

Bij temperatuur 1 heb je a gram enzym nodig om 1 mol substraat om te zetten.
Als je nu een temperatuur 2 kiest waarbij de aktiviteit van het enzym de helft is van de activiteit bij temperatuur 1 dan heb je 2.a gram enzym nodig om 1 mol substraat om te zetten.

Even vergeten wel beide in dezelfde tijd :)

Veranderd door Gerard, 01 februari 2006 - 23:02


#11

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 22:59

Tja, je hebt nog te weinig gegevens, de eenheid unit is micromol/minuut, deze eenheid zegt iets over hoeveel substraat er wordt omgezet. Je hebt verder te weinig gegevens over het enzym zelf..

Als eerste zei je dat je een een zuivering hebt uitgevoerd.
Je kan wel uitrekenen wat de zuiveringsfactor is, als je je activiteit weet voordat je bent begonnen met zuiveren.

#12

netherlie

    netherlie


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 23:25

Alles is gemeten bij 37 graden.

Ik heb verschillende monsters genomen tijdens de zuivering en van elk moster het volume bepaald, de geleidbaarheid (maar die is niet van belang hiervoor), de enzymactiviteit, totaal eiwit en een SDS-PAGE.

Wat zou ik nog meer over het enzym te weten moeten komen
van het enzym heb ik
IEP = 8,52
Mw = 35702 kD

groetjes nathalie
De gebruiker voorheen bekend als kolonelvonklink.

#13

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 01 februari 2006 - 23:46

Er is geen mogelijkheid om van u/l naar gram/l of mol/l te komen.
De unit is bedoeld om de activiteit van een enzym te kunnen uitdrukken om een maat voor de funktie te hebben, omdat dat is wat je wilt weten van een enzym.

Je activiteit wordt door zeer veel factoren bepaalt zoals bijvoorbeeld:
Temperatuur, Substraatsysteem (pH, concentraties, buffers, co-enzymen enz).
Zijn er isoenzymen aanwezig, hoeveel van de funktionele groepen zijn aktief, zijn er genatureerde eiwitten, zijn er competatieve eiwitten of remmers aanwezig.

#14

netherlie

    netherlie


  • 0 - 25 berichten
  • 7 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 01 februari 2006 - 23:54

mensen ik wil jullie heel erg bedanken. Ik ben eruit.
En weet je wat het is (niet lachen).
Ik heb een standaard meegenomen en daarmee kan ik het natuurlijk berekenen.
Helemaal niet aan gedacht. echt erg :)
Had de gegevens van de standaard in me labjournaal staan maar niet in me resultaten in me verslag gezet. sorry.

Maar toch bij deze heel erg bedankt voor jullie snelle reactie.

Groetjes
Nathalie
De gebruiker voorheen bekend als kolonelvonklink.

#15

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 02 februari 2006 - 10:46

tja...... :)





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures