Springen naar inhoud

kalibratielijn


  • Log in om te kunnen reageren

#1

poeder

    poeder


  • >25 berichten
  • 36 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2006 - 14:37

Met de RP-HPLC is een kalibratie met een zuivere stof uitgevoerd. in de grafiek is op de x-as de concentratie en op de y-as het piek oppervlak.
Waar kan het aan liggen wanneer een kaklibratielijn niet bij de coordinaten [0,0] begint/

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

The Herminator

    The Herminator


  • >1k berichten
  • 2035 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2006 - 14:58

Er kunnen vele redenen zijn; stof niet 100% zuiver, verstoring detectie door loopvloeistof, afwijkend gedrag van je stof bij bepaalde concentraties, zowel t.o.v. de kolom als "intern"......

Je hebt nu misschien met je "scheve" kalibratielijn juist een nette "correctie-factor" voor het systeem bepaald! ;)

#3

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2006 - 15:01

Ik "denk" (misschien gaat het daar fout) dat het door het volgende komt.

Je kan meestal bij het opstellen van de ijklijn in de software aangeven of de lijn door nul dient te gaan of niet. Als je aangeeft dat deze door nul moet gaan dan wordt de ijklijn zo gelegd dat deze (uiteraard) ten eerste door nul gaat en vervolgens wordt de helling van de lijn zo genomen dat deze een zo klein mogelijke afstand heeft t.o.v de ijkpunten (least squares regression).

Als je aangeeft dat de ijklijn niet door nul hoeft te gaan dan wordt (als het goed is)de gemiddelde waarde genomen van de ijkpunten. De ijklijn wordt dan door dit punt getrokken en de helling wordt dan vervolgens net zo gekozen als hierboven beschreven (dus weer least squares regression).
Als je ijklijn perfect is dan zou deze logischerwijze door nul gaan. Geen aanwezigheid van analiet leverd uiteraard geen peakarea. Maar het is nu eenmaal nooit perfekt.

Grtz
Bas

ps: misschien is mijn uitelg niet helemaal juist, maar dan hoor je/ik het wel ;)

#4

poeder

    poeder


  • >25 berichten
  • 36 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2006 - 21:41

Dit zijn de gegevens die ik heb verkregen.

concentratie (microg/ml)
0
20
40
60
80
100

piekoppervlak
42168
282274
1104370
2136104
3116320
4336718

piekoppervlak gecorrigeerd
0
240105
1062201
2093936
3074152
4294549

blauw is uitgezet in een grafiek.

verkregen grafiek vergelijking: y= 44295x-420601 R2 = 0,9706

afwijkend gedrag van je stof bij bepaalde concentraties, zowel t.o.v. de kolom als "intern"......


Wat bedoel je hiermee? Ik snap dit niet. ;)

"scheve" kalibratielijn juist een nette "correctie-factor" voor het systeem bepaald!


wat voor correctiefactor? Ik snap dit niet. :)

Veranderd door poeder, 29 maart 2006 - 21:43


#5

The Herminator

    The Herminator


  • >1k berichten
  • 2035 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 29 maart 2006 - 23:30

Je ijkstof kan zich soms "vreemd" (= afwijkend van ideaal) gedragen, door interactie met de kolom, of door "interne" interactie (bijv. aggregaatvorming)...

Als je kalibratielijn niet door nul gaat, zit er dus ergens een fout in het hele meetsysteem.... je kan dan gewoon je meetwaardes corrigeren aan de hand van de kalibratielijn die je hebt gemaakt! Dit werkt alleen als de fout in het meetsysteem systematisch is, dus altijd optreedt...

Simpel voorbeeld: je kalibratielijn gaat door punt 1,0 i.p.v. door punt 0,0... je moet dan al je meetwaardes corrigeren met een waarde -1,0 (de "correctiefactor" dus) ;)

#6

DrQuico

    DrQuico


  • >1k berichten
  • 2952 berichten
  • VIP

Geplaatst op 29 maart 2006 - 23:47

Dit is dan ook de reden waarom je een kalibratielijn maakt, om te corrigeren voor het door jou gebruikte meetsysteem. Dit is nauwkeuriger dan gebruik van enkel een literatuurwaarde.

#7

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 30 maart 2006 - 09:32

Ik schat in dat een deel van het probleem zit in het punt dat je te maken hebt met een calibratielijn die niet lineair is maar een kromme en je dus een andere funktie moet gebruiken. Door dit niet lineaire verloop krijg je de grootste afwijkingen bij de 0 en maximale waarde.

#8

poeder

    poeder


  • >25 berichten
  • 36 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 maart 2006 - 14:54

De kalibratielijn hoort lineair te verlopen. Dit is terug te voeren naar de literatuur. Het enige verschil is dat volgens de gevonden literatuur de gradient elutie is toegepast omdat het monster een complexe matrix heeft en ik heb dat niet gedaan omdat het niet mogelijk was.

#9

jb31dec

    jb31dec


  • >100 berichten
  • 238 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 31 maart 2006 - 15:06

ik denk dat je wel signaal vind waar je dat niet zou moeten vinden
ofwel een groter piekoppervlak dan je verwachten zou, door een vervuiling
kan het zijn dat je een carryover krijgt? (heb je voor de blanco monsters of standaarden gemeten)

ten tweede is de lineariteit slecht.
een r^2 van 0,97 is veel te laag.

(Ook kan het zijn dat je kolom vervuild is of dat je eluens niet geschikt is)

wat erg zou helpen is vertellen om welke stof het gaat, welk eluens je gebruikt en welke instellignen HPLC: flow, T etc.

#10

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 31 maart 2006 - 16:14

De kalibratielijn hoort lineair te verlopen. Dit is terug te voeren naar de literatuur


Dit kan wel zo zijn, maar je hebt in de praktijk bij je metingen geen lineaire lijn en dan zul echt moeeten uitgaan van een niet lineaire lijn bij je berekeningen anders reken je je monsters echt verkeerd uit.
Wil je echt dat het volgens een lineaire calibratielijn verloopt dan zul aan de methode moeten gaan sleutelen want die is dan niet in orde.

Gerard

#11

poeder

    poeder


  • >25 berichten
  • 36 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 04 april 2006 - 10:46

HPLC instellingen:

Isocratische elutie waarbij in het monster maar 1 piek en dus 1stof gescheiden moet worden en niet alle stoffen en dus pieken.
Dit omdat het monster materiaal uit heel veel (complexe)stoffen bestaat.
Normaliter zou deze bepaling d.m.v de gradient elutie uitgevoerd worden maar de apparatuur hiervoor was niet beschikbaar en men wilde eerst weten of het met de beschikbare apparatuur uitgevoerd kon worden.

Eluens is 1 mengsel (isocratische elutie)
24 % acetonitrille + 74 % water + 2 % 0,1 N fosforzur

flow
0,2 ml/min

Kolom Temperatuur
Niet te bepalen

RP-Kolom

C18

Stof

Geplaatste afbeelding

Veranderd door poeder, 04 april 2006 - 10:51


#12

jb31dec

    jb31dec


  • >100 berichten
  • 238 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 april 2006 - 07:27

poeder,

wat was de oorspronkelijke gradiŽnt methode?
Waarom werd deze gebruikt?
(om alle restanten van de kolom te spoelen?)

Overigens vind ik het niet gebruikelijk (m√≠jn eigen ervaring) om calibratielijnen bij HPLC analyses door nul te trekken. Ik doe dit nooit. Je laagste punt van de curve (=laagste standaard) is wat mij betreft het einde van je curve. Lager mag je nůůit meten.

waar je ook (van te voren) zeker van moet zijn is dat je standaarden kloppen.
Heb je een juist oplosmiddel gebruikt en is dat goed te injecteren op de kolom icm eluens?
Dit regressie van je ijklijn is niet goed. R2 is erg laag. Ik betwijfel of je standaarden goed zijn. JE dient daarbij o.a. op te letten dat je oplosmiddel niet al te afwijkend is van je eluens.

#13

vincent1986

    vincent1986


  • >25 berichten
  • 92 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 september 2006 - 11:56

Waarom maak je niet gebruik van piekoppervlakte* detectorgevoeligheidsstand voor het maken van je grafiek.

Dat maakt de waarnemingen betrouwbaarder want ik neem aan dat als je een grote kalibratielijn heb je ook de gevoeligheid van de detector heb aangepast omdat de pieken anders te groot zijn voor de chart. (Overflow situatie)

Als je dat dan uitzet tegen de concentratie moet het goed gaan.

Gebruik je punt met concentratie 0 om de waarde bij een concentratie van 0 aan te geven (als je geen auto zero heb gedaan bij je blanco)

# Moderatoropmerking
rwwh: let even op de leeftijd van een topic voordat je antwoord geeft. We zijn hier niet gewend topics af te sluiten, maar na 5 maanden is er meestal geen reactie meer nodig

Veranderd door rwwh, 25 september 2006 - 21:19


#14

Dutchie86

    Dutchie86


  • >25 berichten
  • 68 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 januari 2007 - 13:39

even een andere vraag over een kalibratielijn...

Ik moet de extinctie uitzetten tegen de zetmeel concentratie...

Moet de extinctie dan op de x-as en de zetmeel concentratie op de y-as of net andersom.. ik twijfel een beetje..


# Moderatoropmerking
Beryllium: Dutchie, lees eens de post DIRECT boven deze... en dan speciaal de opmerking van collega-moderator rwwh... iets over niet in een topic posten als het al zo oud is...?

Veranderd door Beryllium, 20 januari 2007 - 15:46


#15

*_gast_Gerard_*

  • Gast

Geplaatst op 20 januari 2007 - 13:55

Er is geen moeten maar meestal wordt de concentratie op de x-as gezet en de extinctie op de y-as





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures