Retentietijden RP-HPLC

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 36

Retentietijden RP-HPLC

Waar kan het aan liggen wanneer de retentietijd van een piek in het monster niet precies overeenkomt met de retentietijd van de zuivere component? Afwijking is 1 a 2 minuten. Dit terwijl ggen verandering van eluens samenstelling en flow is geweest. Of de temperatuur veranderd is weet ik niet omdat het niet meetbaar is

Berichten: 2.035

Re: Retentietijden RP-HPLC

Kan het zijn dat je monster als geheel de retentie van die ene component, bijv. door moleculaire interacties tussen die component en 1 of meerdere andere componenten van het monster, verandert?

edit: dikke vingers ;)

Berichten: 1.122

Re: Retentietijden RP-HPLC

De matrix van je monster is idd erg belangrijk. Als je matrix van je monster bijvoorbeeld veel meer of minder organisch oplosmiddel bevat dan je standaard dan heb je al problemen.

Vertel eens meer: wat voor componenten analyseer je en wat is de matrix van je monster en je standaard?

Grtz

Bas

edit: dunne vingers ;)

Berichten: 1.153

Re: Retentietijden RP-HPLC

Hoe heb je geinjecteerd (handmatig/autosampler)? wat voor een systeem werk je? wat zijn de parameters? Om welke stof gaat het? uit welk matrix?

Berichten: 36

Re: Retentietijden RP-HPLC

Het gaat om rutine in methanol wortel extract. Naast rutine zitten nog andere onbekende polaire stoffen in het extract.

Zuivere stof opgelost in methanol.

Afbeelding

Handmatige injectie.

isocratisch systeem, mengsel van eluens zelf bereid.

kolom: C18

Berichten: 2.399

Re: Retentietijden RP-HPLC

Methanol als oplosmiddel voor het monster en een c18 kolom gaat niet samen. Verdun de methanol concentratie tot onder de concentratie van methanol in de mobiele fase, dan zit je goed. Hoe ziet je piek vorm er uit? breed?

Berichten: 36

Re: Retentietijden RP-HPLC

Het probleem is dat de zuivere stof alleen in methanol oplosbaar is. Het monster ook. Trouwens hoe moet je de methanol concentratie verdunnen tot onder de methanol concentratie van de mob. fase?

De piek ziet op het oog goed uit.

Bij sommige injecties treedt er staatvorming van de piek op.

Berichten: 1.122

Re: Retentietijden RP-HPLC

Normaal gesproken los je je monster op in een matrix die nagenoeg gelijk is aan je mobiele fase. Dit lukt echter niet altijd. Zoals bijvoorbeeld in jouw geval waar je monster niet goed oplost.

Je zou naar mijn mening je monster op kunnen lossen in methanol (zo´n laag mogelijk % MeOH natuurlijk). Verdunnen kun je simpelweg doen met water.

Als je MeOH% van je monster hoger is dan je eluens probeer dan een zo´n klein mogelijk plug te injecteren. Hoe kleiner je injectievolume hoe sneller je monster in-line verdund en hoe minder problemen je ondervindt met je scheiding. In-line verdunnen gaat relatief snel en daardoor heb je ook geen/weinig problemen met je MeOH in je monster. Logischer wijze gaat die verdunning natuurlijk het snelst als je injectievolume klein is.

Bas

Reageer