PCR met RNA

Lin_CF

Hallo iedereen,

Voor mijn afstudeeronderzoek heb ik DNA en RNA gezuiverd mbv de methode van Boom (maakt gebruik van silica deeltjes waar het DNA en RNA aan bindt)

Het RNA heb ik vermenigvuldigd met de QT-NASBA en het DNA met de PCR. Nou dacht ik dus al die tijd dat deze PCR het DNA vermenigvuldigd maar las ik net dat dat niet zo is...., In mijn verslag staat dat deze PCR gebaseerd is op de amplificatie van een 600bp region van het 18S rRNA gen. Met de kennis die ik heb weet ik echt niet hoe dit nou kan, RNA kan je toch alleen met de RT-PCR vermenigvuldigen?!?! En die heb ik helemaal niet gebruikt. Kan iemand mij dit ajb uitleggen?

thanks alvast,

groetjes Lin

Gideon

Hoi Lin, welkom bij Chemieforum!

Je zegt:

In mijn verslag staat dat deze PCR gebaseerd is op de amplificatie van een 600bp region van het 18S rRNA gen.

Volgens jou kan dit geen DNA zijn, maar ik denk dat dit het wel is. Je hebt het over amplificatie van 600 bp (=dubbelstrengs dan lijkt me = DNA?) en hebt het over het 18s rRNA gen. Het 18s rRNA gen is dus geen RNA maar gewoon DNA dat codeert voor RNA. Ik snap je verwarring, maar denk toch echt dat het klopt.

Roy van Heesbeen

Dit is toch het gen dat vaak gebruikt wordt voor bacterie identificatie?

Is idd een DNA stuk dat codeerd voor het rRNA gen

Lin_CF

Bedankt voor jullie informatie!! Alleen weet ik niet precies wat er met dat "coderen" bedoeld wordt! Graag nog iets meer informatie! Weet iemand misschien nog een goede site met informatie over de QT-NASBA of deze PCR gebasseerd op het 18s rRNA gen?

onwijs bedankt alvast!

Lin

Lin_CF

Nog meer info nodig:

Met de QT-NASBA bedoel ik de Quantitatieve nucleic acid sequence based amplification. Hierbij wordt er een interne standaard toegevoegd (Q-RNA) dat een competitie aangaat met het monster RNA (WT(wild type)). Na deQT-NASBA gebruik ik de ECL methode waarbij ik 3 probes gebruik, 1 detectie probe (wat doet deze?) en 1 voor de WT en 1 voor het Q RNA (gebonden aan magnetische beads).

Wat ik graag nog zou willen weten, waar binden deze probes precies aan en wat gebeurt er verder tijdens deze reactie? Waarom kan deze reactie niet alleen plaats vinden met 1probe voor WT en 1 probe voor Q??

Bij de ECL reactie weet ik wel dat er een magnetisch veld wordt gecreerd waardoor de RNA's (gebonden aan de magnetische beads) aan dit veld binden. De ongebonden RNA's worden dan weggespoeld (of niet?) waarna de overgebleven RNA's gemeten worden (toch?)

tsjee weet er eigenlijk nog niet zo veel vanaf...!! Wie o wie kan mij helpen?

alvast onwijs bedankt,

Lin

Wetenschapsforum

Laatste berichten

Nieuwsberichten

PCR met RNA

PCR met RNA

Re: PCR met RNA

Re: PCR met RNA

Re: PCR met RNA

Re: PCR met RNA