Springen naar inhoud

MeOH bij R-HPLC


  • Log in om te kunnen reageren

#1

dreunie

    dreunie


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 april 2006 - 10:13

Ik heb een probleem, ik heb overal tegenstrijdige dingen staan en kom er nu niet meer uit.
Wanneer je 10 % meer methanol toevoegt aan de mobiele fase van Reversed Phase HPLC --> wordt dan de k' 2x zo groot of 2 x zo klein en waarom? Ik dacht dat hij 2x zo groot werd, aangezien de mobiele fase polairder werd en dus de opgeloste stof minder snel van de apolaire stationaire fase verdrongen word... maar ergens anders vind ik weer dat het andersom is!
Wie kan mij duidelijkheid geven!!

Tnx alvast,

Pleun

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 april 2006 - 10:15

10% meer MeOH aan wat toevoegen?

#3

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 20 april 2006 - 13:10

En over welk analiet hebben we het?

#4

iris_CF

    iris_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 15 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 april 2006 - 13:56

Volgens mij is het zo dat reversed phase wil zeggen dat je een organische stationaire fase en een waterige mobiele fase hebt. Een minder polair oplosmiddel heeft dan een hogere elutiesterkte. Waardoor het analiet (als deze niet polair, ionisch is) minder tijd in de mobiele fase zit.
De formule die bij k' hoort: k' = tijd in stationaire fase/ tijd in mobiele fase
Tijd in mobiele fase wordt korter, dus k' wordt groter.
Hoeveel maal het korter wordt, weet ik niet.. ligt denk ik aan de invloed op de verdelingsconstante of aan de concentratie MeOH of elutiesterkte van MeOH..

Veranderd door iris, 20 april 2006 - 13:58


#5

Jooken

    Jooken


  • >250 berichten
  • 677 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 april 2006 - 15:00

In het onderstaande neem ik aan dat er "klassieke" HPLC gebeurt, dwz een C18 kolom en een mobiele fase bestaande uit een water/methanol mengsel.


De retentiefactor k wordt gedefinieerd als:

k = (tR-tM)/ tM

Met tR de retentietijd en tM de mobiele fasetijd.

Door het toevoegen van meer methanol aan het eluent verlaagt de polariteit van het eluent, waardoor dit meer gaat lijken op de apolaire stationaire fase. De balans in de intermoleculaire krachten tussen stationaire fase --- component --- mobiele fase verschuift hierdoor in de richting van de mobiele fase. Interacties tussen mobiele fase en component versterken dus, en interacties tussen stationaire fase en component verzwakken. Hierdoor daalt de retentietijd van de component, waardoor ook k zal dalen.

Ruwweg zal k met een factor 3 afnemen bij toename van het methanolgehalte met 10%

#6

iris_CF

    iris_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 15 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 april 2006 - 16:18

ik snap hem nu ook, jooken heeft gelijk!

#7

iris_CF

    iris_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 15 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 april 2006 - 16:24

Wat zou er gebeuren met retentietijd als je C8 kolom gebruikt? niets toch?

#8

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 april 2006 - 02:49

Die wordt korter. De c8 kolom is minder sterk dan de c18 kolom.

Nog even ingaan op de opmerking van jooken, de factor is een zeer ruwe schatting voor kleine moleculen, proteines en peptides gedragen zich absoluut niet zo, dus wees niet verbaasd als in de praktijk dingen anders uitwijzen.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures