Springen naar inhoud

DNA-DNA hybridisatie


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Astridje85_CF

    Astridje85_CF


  • >25 berichten
  • 67 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 april 2006 - 15:38

Na alle problemen (die ik hier ook besproken heb ;) ), kan ik eindelijk beginnen met het echte werk, namelijk mijn DNA-DNA hybridisatie.
Ik doe de DNA-DNA hybridisatie in een speciale microtiterplaat waarop ik het referentie DNA (van een bekende stam) bind (de Nucleolink van Nalge Nunc).

Hierbij wordt dan gelabeld test DNA (van een onbekende stam) gedaan, dit wordt gehybridiseerd en m.b.v. fluorescentie wordt dan de hybridisatie gemeten.

Maar ter controle moet je ook de achtergrond hybridisatie meenemen.

Nu heb ik zelf de volgende ideeen:

- Je bind geen referentie DNA aan het welletje en doet er ook geen test DNA bij (als het goed is meet je dan geen fluorescentie)
- Je bind wel referentie DNA aan het welletje maar doet er geen test DNA bij (als het goed is moet je dan ook geen fluorescentie meten).
- Je bind geen referentie DNA maar doet er wel (gelabeld!) test DNA bij (maar dan kan het test DNA aan het welletje binden, ondanks dat er blocking reagens bij gedaan wordt, en kun je dus wel fluorescentie meten).

Wat is nu de beste methode? Ik neig zelf het meest naar de een van de eerste twee, maar kan dit niet goed onderbouwen waarom ik daarvoor kies.

Alvast bedankt!

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 21 april 2006 - 15:45

Ik zou zeggen dat de tweede het beste is.
Ik heb zelf echter geen ervaring met deze techniek.

De waarden die je meet van je 'blanco' kan je aftrekken van de waarden met je monster.
Staat er btw niks in de handleiding hierover? Hier zal toch het een en ander over je controle in moeten staan lijkt mij...

#3

Astridje85_CF

    Astridje85_CF


  • >25 berichten
  • 67 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 24 april 2006 - 11:20

In de handleiding hebben ze het alleen over PCR-controles.

Verder heb ik het verslag van een andere stagiare ingezien en die nam als controle dat er geen referentie DNA gebonden werd, maar wel test DNA in het welletje werd gedaan.
Haar andere controle was dat er helemaal geen DNA in het welletje zat.

Mij lijkt het juist dat je wel referentie DNA bind, maar geen test DNA erbij doet.

#4

biochemiefreak

    biochemiefreak


  • >1k berichten
  • 2330 berichten
  • VIP

Geplaatst op 24 april 2006 - 17:11

Alleen je test DNA is fluoriscerend dus moet je denk ik als controle hebben geen DNA dus pure achtergrond en referentie DNA dat niet fluoriscerend is. Zo weet je of het DNA gebonden is en je weet of je test DNA fluoriscerend als het gebonden is.

MvG Ron





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures