Wetenschapsforum

hey,

Ik heb al op het internet gezocht, maar vond daar gene antwoord op mijn vraag.

Voor mijn thesis moet ik geglycosyleerde proteïnen kleuren. Dit doe ik met de GelCode Glycoprotein stain (pierce) en ik heb het protocol gevonden, maar ik weer niet waarom ik de verschillende stappen moet doen.

dit is het protocol:

1. After electrophoresis, fix gel by completely immersing it in 100 ml of 50% methanol for 30 minutes.

2. Wash gel by gently agitating with 100 ml of 3% acetic acid for 10 minutes. Repeat this step once.

Note: This can be a stopping point. The gel can be left in water overnight at 4°C.

3. Transfer gel to 25 ml of Oxidizing Solution and gently agitate for 15 minutes.

4. Wash gel by gently agitating with 100 ml of 3% acetic acid for 5 minutes. Repeat this step two additional times.

5. Transfer gel to 25 ml of GelCode® Glycoprotein Staining Reagent and gently agitate for 15 minutes.

Note: If crystals form in the GelCode® Glycoprotein Stain, centrifuge solution and remove the supernatant for use. DO

NOT HEAT to dissolve crystals. Only use stain after crystals have been removed.

6. Transfer gel to 25 ml of Reducing Solution and gently agitate for 5 minutes.

7. Wash gel extensively with 3% acetic acid and then with ultrapure water. Glycoproteins appear as magenta bands. Store

gel in 3% acetic acid.

ken iemand mij een verklaring geven waarom ik eerst moet oxideren en na incubatie met het kleurreagens moet reduceren (zonder dan nog eerst te wassen)?

en waarom azijnzuur? is dat niet redelijk nefast voor eiwitten?