Springen naar inhoud

Amplificatie leidt tot kleiner fragment?


  • Log in om te kunnen reageren

#1

kuiken

    kuiken


  • 0 - 25 berichten
  • 2 berichten

Geplaatst op 13 mei 2006 - 10:46

Ik zoek dringend een antwoord op volgend probleem:

Ik amplificeer het genomisch DNA en het overeenkomstige cDNA van een bepaald huishoudgen met bepaalde primers. Als resultaat krijg ik een genomisch dna fragment dat kleiner! is dan mijn cdna! (Geen andere banden). Wat is hier de verklaring voor? Het heeft waarsch. iets te maken met pseudogenen en primers die op exon/intron boundaries gelegen zijn of zo, maar ik kan er geen goeie uitleg aan geven.
Enige hulp zou zr welkom zijn!

rwwh: Bedenk de volgende keer even een duidelijke titel. Titels als "vraag" of "project" zijn zo nikszeggend.

Veranderd door rwwh, 13 mei 2006 - 13:49


Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 13 mei 2006 - 16:10

Ik denk dat dit des te meer te maken heeft met het splicen van het huishoudgen, heb je hier info over? Dat je primers annealen op exon/intron boundaries lijkt me sterk, dan zou je bij je cDNA amplificatie namelijk geen product verwachten.

Veranderd door Gideon, 13 mei 2006 - 16:11


#3

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 13 mei 2006 - 16:37

[learn]Wat is een huishoudgen? Heb ik daar meer van nodig in de lente om mijn huis schoon te maken?[/learn]

#4

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 13 mei 2006 - 20:37

Genen die constant worden afgelezen en in alle cellen voorkomen, zoals genen voor de energiehuishouing in de cellen

#5

Gideon

    Gideon


  • Chemiefoum.nl erelid
  • 337 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 14 mei 2006 - 08:32

Wanneer strak aangehouden zijn huishoudgenen inderdaad betrokken bij het onderhoud in een cel: waaronder genen voor cytoskelet eiwitten (bijv. beta-actine, tubuline).
Zo'n huishoudgen is belangrijk in quantitatieve metingen, het wordt gebruikt als normalisatie in het meten van expressiewaardes. Toch blijken veel huishoudgenen tussen verschillende celtypes en in verschillende condities wel degelijk gereguleerd te worden en wordt huishoudgen een vager begrip.

Daarom kan, zeker bij mRNA quantificatie (RT-QPCR), in principe elk transcript dienen als huishoudgen, zolang de expressie maar vrijwel constant is tussen de verschillende samples.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures