Springen naar inhoud

temperatuur


  • Log in om te kunnen reageren

#1

poeder

    poeder


  • >25 berichten
  • 36 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 07:55

Hoe belangrijk is temperatuur bij een isocratische RP-HPLC scheideing?

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Jeffrey_Buter

    Jeffrey_Buter


  • >250 berichten
  • 857 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 08:13

Een HPLC bepaling doe je bij kamertemperatuur. Je kolom verwarm je niet zoals bij een GC. De invloed van de temperatuur zal daarom ook nihil zijn.
De scheiding pas je aan met de compositie van de mobiele fase en niet met de temperatuur.

Veranderd door JeffreyButer, 15 mei 2006 - 08:14


#3

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 15 mei 2006 - 08:31

Nou, bij ons op het werk doen we de meeste bepalingen wel met een kolomoven (HPLC). Dit om eventuele temperatuurschommelingen in het lab op te vangen (niet dat die er ooit zijn geweest, maar goed).

Op deze manier houden we in ieder geval de retentietijden constant, en deze tijden kunnen we wat variëren door wat te spelen met de kolomtemperatuur. Bovendien zorgt het voor een leuke drukverlaging op de kolom, omdat de "viscositeit" van je mobiele fase afneemt.

Edit: Echter, als je puur de scheiding bekijkt, is de mobiele fase van veel grotere invloed zoals Jeffrey al zegt.

Veranderd door Raspoetin, 15 mei 2006 - 08:34

I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#4

mmaarr

    mmaarr


  • >100 berichten
  • 184 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 08:39

Temperatuur heeft wel degelijk invloed.
Denk aan een kleiner k bij hogere temperatuur (pieken elueren eerder)
Verder heeft een hoger temperatuur invloed op de efficientie (Nth), deze neemt bij temperatuur verhoging toe.
Omdat bij HPLC het temperatuurwerkgebied niet al te groot is (van ca 5°C tot max 80°C) zal de invloed van de temperatuur niet al te groot zijn.
Aan te raden is het wel om bij een constante temperatuur te werken, bij voorkeur om de kolom in een "oven" te plaatsen.

#5

Jeffrey_Buter

    Jeffrey_Buter


  • >250 berichten
  • 857 berichten
  • Gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 08:44

Nou, bij ons op het werk doen we de meeste bepalingen wel met een kolomoven (HPLC). Dit om eventuele temperatuurschommelingen in het lab op te vangen (niet dat die er ooit zijn geweest, maar goed).

Op deze manier houden we in ieder geval de retentietijden constant, en deze tijden kunnen we wat variëren door wat te spelen met de kolomtemperatuur. Bovendien zorgt het voor een leuke drukverlaging op de kolom, omdat de "viscositeit" van je mobiele fase afneemt.

;) Bij mij op school gebruiken we dus geen kolomoven. De retentietijden zijn wel behoorlijk constant.
Waarschijnlijk spuiten jullie een meer componenten bevattend mengsel in dan wij op school doen. Wij kunnen het wel alleen af door de compositie van de mobiele fase te veranderen.

#6

poeder

    poeder


  • >25 berichten
  • 36 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 08:54

Als je monster uit heel veel verschillende stoffen bestaat . De stoffen zijn complex. Speelt de temperatuur dan nog steeds geen rol?

#7

Raspoetin

    Raspoetin


  • >1k berichten
  • 3514 berichten
  • VIP

Geplaatst op 15 mei 2006 - 09:40

De temperatuur speelt dan in zoverre een rol dat de pieken bij verandering van temperatuur een andere retentietijd krijgen. De relatieve retentietijd zal echter hetzelfde blijven. De volgorde van elutie verandert echter niet; je resolutie tussen de verschillende pieken kan wel toe- of afnemen. Een andere mobiele fase kan tot gevolg hebben dat je componenten op een andere volgorde elueren.
I'm not suffering from insanity - I'm enjoying every minute of it!!

#8

Jampie

    Jampie


  • >25 berichten
  • 59 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 10:39

Bij mij op school gebruiken we dus geen kolomoven. De retentietijden zijn wel behoorlijk constant.
Waarschijnlijk spuiten jullie een meer componenten bevattend mengsel in dan wij op school doen. Wij kunnen het wel alleen af door de compositie van de mobiele fase te veranderen.


Hanze hè? Tjsa ik weet er alles van... Hebben niet geweldige HPLC's (laat staan IC)... maar ja wat doe je eraan? (snel afstuderen ;) )

#9

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 14:11

Mijn ervaring is dat pieken echt minuten kunnen verschuiven zonder een kolom oven. Een goede robuste analyse geeft zowel in de winter als in de zomer hetzelfde chromatogram. Een kolom oven is hier van groot belang in mijn ogen.

#10

cheMister

    cheMister


  • >250 berichten
  • 266 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 15 mei 2006 - 16:36

Injecteer maar eens bij 15°C en bij 40°C. Er is meestal een groot verschil in retentietijd.
Ik werk met chirale stationaire fases en een temperatuurverschil van 20°C kan een verschil in retentietijd geven van soms wel 20minuten of langer.

Bij chirale is het zo dat hoe lager de temperatuur is hoe selectiever de kolom is. Nadeel is de piekverbreeding bij die lagere temperatuur.

Nog een voorbeeldje van temperatuur is hetgeen waarmee agilent graag uitpakt.
Namelijk dat water bij 20°C polair is maar bij 100°C niet meer. Je kan dan een reversed phase gradient laten lopen met enkel water. Green chromatography.

Het bovenstaand voorbeeldje (misschien wel wat extreem) toont wel aan dat de relatieve retentie echt wel kan veranderen. Een verschil in polariteit van de mobiele fase geeft een ander chromatogram.

Veranderd door cheMister, 15 mei 2006 - 16:39






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures