Ik doe real-time PCR met SYBR Green. Ik gebruik 2 plasmideverdunningen en één cDNA staal en een blanco. De blanco blijft mooi negatief. Bij bekijken van de smeltcurves vallen de pieken van het cDNA en de plasmides bij dezelfde temperatuur, zoals verwacht, want hetzelfde fragment wordt geamplificeerd, MAAR, mijn cDNA piek is véél breder en niet zo scherp als de plasmide pieken (die mooi samenvallen). Wat is de verklaring hiervoor?
Mvg
Laatste berichten
-
18:08
Aardlek-schakelaar
-
16:45
wig 8
-
15:56
Programmeren met vectoren 6
-
14:53
Straatklok loopt 5 minuten voor 12
-
23:12
speciale rel. theorie 10
-
22:36
Gravity and gravitation 4
-
22:24
[scheikunde] vraag Chemie - wat is de oplossing? 10
-
19:47
Bruine vlekken op treinaanwijzerbord 10
-
19:44
Vogels in de stad zijn goede klussers 2
-
19:12
Rood laserlicht 3
-
25 apr
Herleiden afmetingen vanaf een foto 21
-
25 apr
[wiskunde] Prijs Product per KG; Alternatief Inzicht 3
-
25 apr
do-re-mi-fa-so vliegtuigen 9
-
25 apr
geen minkowski-ruimte toch? Doe ik dit nou fout? 17
-
25 apr
[natuurkunde] kroon van koning op Syracuse 10
-
25 apr
2013 – Augustus Vraag 3 3
-
24 apr
Vraag 2009 Juli Vraag 5 5
-
24 apr
positie 2
-
24 apr
Schroefdraad berekening 8
-
24 apr
[scheikunde] Kan chloorgas de geleiding van elektriciteit belemmeren? 9
Nieuwsberichten
-
04 mar
Een nieuw soort magnetisme: altermagnetisme
-
31 okt
AI kan via stem diabetes vaststellen 11
-
21 okt
Einstein krijgt wéér gelijk 45
-
07 feb
witter dan wit 20
-
19 jun
irrigatie en de aardas
Brede smeltcurve-piek bij real-time PCR
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 337
Re: Brede smeltcurve-piek bij real-time PCR
Omdat je geen strakke smeltcurve krijgt denk ik dat in je cDNA amplificatie niet één zuiver product hebt. Je hebt nu dus een soort van smelttraject (dus van verschillende DNA fragmenten). Dit schiet me zo te binnen:
- Wat voor gen amplificeer je, zijn je primers wel specifiek genoeg?
- Wat is de bron van je cDNA en hoe heb je of is dit gemaakt?
- Wat voor gen amplificeer je, zijn je primers wel specifiek genoeg?
- Wat is de bron van je cDNA en hoe heb je of is dit gemaakt?
