Springen naar inhoud

Zuiveren DNA


  • Log in om te kunnen reageren

#1

nijn_CF

    nijn_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 8 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 18 juni 2006 - 21:15

Hoi iedereen,

Ik heb een vraagje over het zuiveren van plasmide DNA met behulp van een kit.

Onder de aanwezigheid van chaotropische zouten bindt het plasmide DNA aan het silicamembraan van de kolom maar wat/hoe gebeurt dit dan?

Het plasmide DNA wordt uiteindelijk van de kolom geŽlueerd met een licht alkalische buffer onder lage ionische condities, hoe gebeurt dit?

Tenslotte: als poly ethyleen glycol wordt gebruikt bij de directe zuivering van PCR producten, hoe komt het dan dat lange DNA fragmenten hierdoor worden neergeslagen en korte fragmenten, primers, DNTPs, buffers en enzymen in oplossing blijven?

Ik hoop dat iemand mij hierbij kan helpen 8-)

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 juni 2006 - 08:24

Ik gebruik de plasmide purification kit van Qiagen.
Op de website (www.qiagen.nl) staat een handleiding waarin staat hoe de kollom precies werkt.

#3

nijn_CF

    nijn_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 8 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 19 juni 2006 - 19:04

Ik maak gebruik van de kit van Machery-Nagel.
Op de site staat inderdaad hoe de kolom werkt maar ik zou graag de preciese reacties weten van binding en elutie?
En ook de werking van poly ethyleen glycol is me niet helemaal duidelijk.
Groetjes

#4

Roy van Heesbeen

    Roy van Heesbeen


  • >250 berichten
  • 740 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juni 2006 - 22:21

polyetheleen zal wel een bepaalde affiniteit hebben voor het DNA net als sillica.
Doordat het DNA negatief geladen is bindt dit vaak aan een positieve groep.
Door de zout concentraties te veranderen verzwakt of versterkt dit de binding aan de kollom.
De reactie precies weet ik niet, dit ligt aan de kollom die wordt gebruikt.





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures