volgorde verbindingen bij HPLC

Moderator: ArcherBarry

Reageer
Berichten: 4

volgorde verbindingen bij HPLC

Ik heb een vraag. Ik heb een droog extract van echinacea gecheiden met behulp van RP-HPLC. Ik vroeg me af waarom eerst het chlorogeenzuur, dan het echinacoside en vervolgens het cichorinezuur wordt geëlueerd. Ik dacht dat de meest polaire verbinding eerst kwam: echinacoside heeft 2 suikermolecules in zijn structuur, dus is dan toch het meest polair, niet?

Berichten: 857

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

Ik ken de stoffen wie je gescheiden hebt niet maar inderdaad hoort het meest polaire molecuul eraf te komen. Je mobiele fase is immers polair.

Maar heeft echinacoside niet een structuur waarbij interne waterstofbruggen gevormd worden waardoor de polariteit afneemt? Zoals gezegt ken ik de structuur van het molecuul niet maar dit is het enige wat ik bedenken na jou uitleg van de proef.

Berichten: 4

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

Zou het soms kunnen dat de polariteit wordt beïnvloed door de symmetrie van een molecule, omdat cichorinezuur een perfect symmetrische molecule is en laatst komt.

Berichten: 2.399

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

wat was de pH van de mobielefase?

Berichten: 4

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

De pH was 2 (water met fosforzuur)

Berichten: 2.035

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

cLogP waardes voor deze 3 verbindingen:

Echinacoside: -2.92

Chlorogeenzuur: 0.74

Cichorinezuur: 0.58

Echinacoside zou dus ruim het eerste van de kolom af moeten komen, vervolgens Cichorinezuur en als laatste Chlorogeenzuur (al ontlopen die laatste twee elkaar weinig!).....

Echinacoside is zoveel meer polair dan de andere twee dat interne waterstofbrug-vorming hier geen rol kan spelen! 8-)

Er is dus iets vreemds aan de hand.... reageert er niet iets met je fosforzuur?

Berichten: 2.399

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

Nog maar een vraag, wat was de kolom en de grote van de porien? Kan iemand de pKa van die carbonzuren geven, er zit teveel in de buurt voor mij om een nauwkeurige schatting te maken? Ik heb nu geen chemdraw bij de hand 8-)

Zeker die van chlorogeenzuur is interessant denk ik

Berichten: 4

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

kolom: Licrospher RP-18e (5 µm), lengte 250.00 mm, interne diameter 4.00 mm

Met die pKa kan ik je niet helpen. Ben daar niet zo in thuis 8-)

Berichten: 2.035

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

Napoleon1981 schreef:Nog maar een vraag, wat was de kolom en de grote van de porien? Kan iemand de pKa van die carbonzuren geven, er zit teveel in de buurt voor mij om een nauwkeurige schatting te maken? Ik heb nu geen chemdraw bij de hand 8-)

Zeker die van chlorogeenzuur is interessant denk ik
Mijn software geeft:

Echinacoside: 13.1 en 15.0

Chlorogeenzuur: 3.4, 9.5 en 12.1

Cichorinezuur: 5.1 en 9.5

Structuren:

Afbeelding

Succes Napoleon! :)

Berichten: 2.399

Re: volgorde verbindingen bij HPLC

Thanx herminator.

De pKa van die carboxyphenol in Chlorogeenzuur is 3.4. De pH van de mobiele fase is 2. Ik weet niet hoe nauwkeurig die pH is vastgesteld, maar nu en zeker als hij iets hoger is dan is de carboxyphenol deels gedeprotoneerd en dus geladen. Dit is het enige molecuul dat dit kan, gezien de grote van het molecuul heeft dit een significante invloed op de retentie en zou het mij niet verbazen als deze dus inderdaad eerder elueert.

Reageer