volgorde verbindingen bij HPLC
Moderator: ArcherBarry
-
- Berichten: 4
volgorde verbindingen bij HPLC
Ik heb een vraag. Ik heb een droog extract van echinacea gecheiden met behulp van RP-HPLC. Ik vroeg me af waarom eerst het chlorogeenzuur, dan het echinacoside en vervolgens het cichorinezuur wordt geëlueerd. Ik dacht dat de meest polaire verbinding eerst kwam: echinacoside heeft 2 suikermolecules in zijn structuur, dus is dan toch het meest polair, niet?
-
- Berichten: 857
Re: volgorde verbindingen bij HPLC
Ik ken de stoffen wie je gescheiden hebt niet maar inderdaad hoort het meest polaire molecuul eraf te komen. Je mobiele fase is immers polair.
Maar heeft echinacoside niet een structuur waarbij interne waterstofbruggen gevormd worden waardoor de polariteit afneemt? Zoals gezegt ken ik de structuur van het molecuul niet maar dit is het enige wat ik bedenken na jou uitleg van de proef.
Maar heeft echinacoside niet een structuur waarbij interne waterstofbruggen gevormd worden waardoor de polariteit afneemt? Zoals gezegt ken ik de structuur van het molecuul niet maar dit is het enige wat ik bedenken na jou uitleg van de proef.
-
- Berichten: 4
Re: volgorde verbindingen bij HPLC
Zou het soms kunnen dat de polariteit wordt beïnvloed door de symmetrie van een molecule, omdat cichorinezuur een perfect symmetrische molecule is en laatst komt.
-
- Berichten: 2.035
Re: volgorde verbindingen bij HPLC
cLogP waardes voor deze 3 verbindingen:
Echinacoside: -2.92
Chlorogeenzuur: 0.74
Cichorinezuur: 0.58
Echinacoside zou dus ruim het eerste van de kolom af moeten komen, vervolgens Cichorinezuur en als laatste Chlorogeenzuur (al ontlopen die laatste twee elkaar weinig!).....
Echinacoside is zoveel meer polair dan de andere twee dat interne waterstofbrug-vorming hier geen rol kan spelen!
Er is dus iets vreemds aan de hand.... reageert er niet iets met je fosforzuur?
Echinacoside: -2.92
Chlorogeenzuur: 0.74
Cichorinezuur: 0.58
Echinacoside zou dus ruim het eerste van de kolom af moeten komen, vervolgens Cichorinezuur en als laatste Chlorogeenzuur (al ontlopen die laatste twee elkaar weinig!).....
Echinacoside is zoveel meer polair dan de andere twee dat interne waterstofbrug-vorming hier geen rol kan spelen!
Er is dus iets vreemds aan de hand.... reageert er niet iets met je fosforzuur?
-
- Berichten: 2.399
Re: volgorde verbindingen bij HPLC
Nog maar een vraag, wat was de kolom en de grote van de porien? Kan iemand de pKa van die carbonzuren geven, er zit teveel in de buurt voor mij om een nauwkeurige schatting te maken? Ik heb nu geen chemdraw bij de hand
Zeker die van chlorogeenzuur is interessant denk ik
Zeker die van chlorogeenzuur is interessant denk ik
-
- Berichten: 4
Re: volgorde verbindingen bij HPLC
kolom: Licrospher RP-18e (5 µm), lengte 250.00 mm, interne diameter 4.00 mm
Met die pKa kan ik je niet helpen. Ben daar niet zo in thuis
Met die pKa kan ik je niet helpen. Ben daar niet zo in thuis
-
- Berichten: 2.035
Re: volgorde verbindingen bij HPLC
Mijn software geeft:Napoleon1981 schreef:Nog maar een vraag, wat was de kolom en de grote van de porien? Kan iemand de pKa van die carbonzuren geven, er zit teveel in de buurt voor mij om een nauwkeurige schatting te maken? Ik heb nu geen chemdraw bij de hand
Zeker die van chlorogeenzuur is interessant denk ik
Echinacoside: 13.1 en 15.0
Chlorogeenzuur: 3.4, 9.5 en 12.1
Cichorinezuur: 5.1 en 9.5
Structuren:
Succes Napoleon!
-
- Berichten: 2.399
Re: volgorde verbindingen bij HPLC
Thanx herminator.
De pKa van die carboxyphenol in Chlorogeenzuur is 3.4. De pH van de mobiele fase is 2. Ik weet niet hoe nauwkeurig die pH is vastgesteld, maar nu en zeker als hij iets hoger is dan is de carboxyphenol deels gedeprotoneerd en dus geladen. Dit is het enige molecuul dat dit kan, gezien de grote van het molecuul heeft dit een significante invloed op de retentie en zou het mij niet verbazen als deze dus inderdaad eerder elueert.
De pKa van die carboxyphenol in Chlorogeenzuur is 3.4. De pH van de mobiele fase is 2. Ik weet niet hoe nauwkeurig die pH is vastgesteld, maar nu en zeker als hij iets hoger is dan is de carboxyphenol deels gedeprotoneerd en dus geladen. Dit is het enige molecuul dat dit kan, gezien de grote van het molecuul heeft dit een significante invloed op de retentie en zou het mij niet verbazen als deze dus inderdaad eerder elueert.