Springen naar inhoud

UV-detectie


  • Log in om te kunnen reageren

#1

stagair_CF

    stagair_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 juni 2006 - 18:43

Hey, kan mij iemand vertellen waarom de UV-detectie bij HPLC bij 214 nm en 280 nm gemeten wordt?

groetjes

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 25 juni 2006 - 18:57

Wat absorbeert er bij deze golflengten?

#3

stagair_CF

    stagair_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 juni 2006 - 19:00

Die vraag heb ik gesteld i.v.m. mijn stage. Het was de bedoeling eiwitten die voorkomen in de kop van de honingbij te identificeren d.m.v HPLC.

groetjes

#4

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 25 juni 2006 - 20:55

Ik herhaal mijn wedervraag. Wat zit er in die eiwitten dat absorbeert bij 280nm?

#5

Jampie

    Jampie


  • >25 berichten
  • 59 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 juni 2006 - 21:30

Om even correct te zijn: er wordt niet alleen bij deze twee golflengten gemeten als je praat over UV-detectie bij HPLC. Waarschijnlijk bedoel je het niet zo, maar zo staat het er wel.

#6

stagair_CF

    stagair_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 25 juni 2006 - 21:51

Er werd een chromatogram weergegeven van de meting bij 214 nm en 280 nm. Mijn begeleidster zei dat dit een mogelijke vraag kon zijn op de verdediging maar kon het geen antwoord zijn. ze dacht dat het iets te maken had met de aromatische groepen ofzo.

#7

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2006 - 08:27

Je kiest de golflengte zo, dat je molecuul ten eerste absorbeert bij die golflengte. En ten tweede kies je het liefst een golflengte die zo specifieke mogelijk is voor je te analyseren molecuul.

Als je molecuul dus karakteristieke groepen bevat dan is het dus het meest logisch om je golflengte daar op `af te stemmen´.

214nm lijkt mij niet zo´n selectieve golflengte. Bij 214nm absorbeert zo´n beetje alles.... 8-)

#8

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2006 - 08:44

Bij 214 meet je de absorptie van de protein backbone. Dit is zeer gebruikelijk, niet ieder proteine heeft bijvoorbeeld een aromatisch aminozuur etc. Het signaal van de backbone is zowiezo sterker.

Bij 280 meet je specifiek naar iets. Ik neem aan dat iemand op je stage bedrijf wel weet waarom er daar gemeten wordt, je bent naar iets specifieks op zoek iig.

Veranderd door Napoleon1981, 26 juni 2006 - 09:27


#9

Fuzzwood

    Fuzzwood


  • >5k berichten
  • 11101 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 26 juni 2006 - 11:36

Volgens mij heb je het zelf al eens gezegd.

#10

stagair_CF

    stagair_CF


  • 0 - 25 berichten
  • 4 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2006 - 11:56

Ik hetzelf al gezegd?

#11

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2006 - 16:19

Ik snap de opmerking van FSWD ook niet. Als je doelt op de aromaten die genoemd zijn, die absorberen standaard bij 254, dus er wordt hoogstens naar een aromaat gemeten met zekere functionele groep er aangebonden.

#12

rwwh

    rwwh


  • >5k berichten
  • 6847 berichten
  • Moderator

Geplaatst op 26 juni 2006 - 20:43

http://www.ibivu.cs....pectroscopy.pdf

Tryptofaan zit bovenop die 280nm. Bij ~210 zit de backbone inderdaad. De waarde van precies 214 nm zal waarschijnlijk komen door de sterke emissie van een Zn lamp op die lijn. Daar is tenminste via google een hoop over te lezen.

#13

The Herminator

    The Herminator


  • >1k berichten
  • 2035 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 26 juni 2006 - 22:07

Klopt helemaal! 8-)

De meest gebruikte lampen zijn:

Kwik: 254 nm
Cadmium: 225 nm
Zink: 214 nm

Toevoeging: UV-absortie van eiwitten komt van de tyrosine- en tryptofaan-groepen (en in mindere mate van fenylalanine-goepen en disulfide-bruggen).....

Veranderd door The Herminator, 26 juni 2006 - 22:12






0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures