Springen naar inhoud

GradiŽntelutie en stapsgewijze elutie


  • Log in om te kunnen reageren

#1

Annelieseke

    Annelieseke


  • 0 - 25 berichten
  • 8 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 09:18

Hey!
Kunnen jullie mij duidelijke verschillen geven tussen deze 2 vormen van elutie? Zijn er nadelen aan verbonden? Worden ze onder bepaalde omstandigheden beter niet gebruikt?

Bedankt!

Greetzzz,
Annelies

Dit forum kan gratis blijven vanwege banners als deze. Door te registeren zal de onderstaande banner overigens verdwijnen.

#2

rage against the machine

    rage against the machine


  • >250 berichten
  • 278 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 09:49

welke (instrumentele) techniek? Dat kan helpen bij beantwoorden

Veranderd door rage against the machine, 20 juli 2006 - 09:50


#3

Annelieseke

    Annelieseke


  • 0 - 25 berichten
  • 8 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 09:54

HPLC en MPLC

#4

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 11:43

Wat bedoel je met stapsgewijs? Isocratisch?

#5

Annelieseke

    Annelieseke


  • 0 - 25 berichten
  • 8 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 12:06

GradiŽnt: met een bepaalde helling verhogen
Stapsgewijs: in stapjes verhogen, dus niet via 1 of andere rechte

#6

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 12:37

Stel je hebt 4 moleculen die je wil scheiden op een C8 kolom. Molecuul 1 is vele malen polairder dan molecuul 4 en molecuul 2 en 3 zitten qua polariteit daar ergens tussen. Voor een goede scheiding kun je dan kiezen voor een lineaire gradiŽnt van bijv 20% Acetonitriel(ACN) naar 80% ACN. Bij 20% elueert je polaire molecuul vrij snel en richting de 80% ACN komt ook je sterk apolaire molecuul 4 van je kolom af.

Bij een step gradiŽnt run je bijv 10 minuten op 20% ACN waarna je direct in ťťn stap naar de 80% gaat. Als je bijvoorbeeld drie van je moleculen van je kolom af hebt dan kun je in ťťn stap naar een hoog percentage ACN gaan om snel molecuul 4 eraf te hebben. Of, je hebt slechts 2 moleculen met een groot verschil in polariteit. Dan is een gradiŽnt niet logisch en kun je voor de stepgradiŽnt gaan.

Een nadeel van een step-gradiŽnt is dat je nogal kans hebt op een verstoring in je basislijn door het plotselinge verschil in percentage ACN (in het Duits "Schlieren"; een effect dat kort gezegd neerkomt op verschillende lagen ACN/H2O/ACN/H2O in je tubing met dus verschillende absorptie in deze lagen wat leidt tot een erg vreemde basislijn in je (absorptie)chromatogram). Bij een lineaire gradiŽnt zie je dat niet of nauwelijks aangezien je dan soepel over gaat van weinig naar veel ACN.

Duidelijk? :oops:

Bas

Veranderd door bteunissen, 20 juli 2006 - 12:40


#7

Annelieseke

    Annelieseke


  • 0 - 25 berichten
  • 8 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 12:44

Hťťl duidelijk!

Bedankt!! :oops:

#8

Annelieseke

    Annelieseke


  • 0 - 25 berichten
  • 8 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 12:48

Voor een C18-kolom blijft deze uitleg hetzelfde veronderstel ik??

#9

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 13:06

uiteraard!! Geplaatste afbeelding

#10

JeroenCV

    JeroenCV


  • >1k berichten
  • 1153 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 13:15

Een nadeel van een step-gradiŽnt is dat je nogal kans hebt op een verstoring in je basislijn door het plotselinge verschil in percentage ACN (in het Duits "Schlieren"; een effect dat kort gezegd neerkomt op verschillende lagen ACN/H2O/ACN/H2O in je tubing met dus verschillende absorptie in deze lagen wat leidt tot een erg vreemde basislijn in je (absorptie)chromatogram). Bij een lineaire gradiŽnt zie je dat niet of nauwelijks aangezien je dan soepel over gaat van weinig naar veel ACN.

Met een beetje goede mixer in je pomp moet dit effect toch niet zo groot zijn, hoor Bas.

ps. hoe bevalt Duitsland?

#11

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 13:26

Voor de duidelijkheid

Beide zijn gradient eluties. Wat jij een gradient noemt is een lineare gradient. Staps gewijs is een stepgradient, maar je hebt ook nog andere gradienten, exponentiele etc.

#12

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 13:50

Met een beetje goede mixer in je pomp moet dit effect toch niet zo groot zijn, hoor Bas.

ps. hoe bevalt Duitsland?

Klopt ook. Afhankelijk of je high of low pressure mixing hebt.
Blijft echter toch: hoe goed je pomp ook mixt; er blijft altijd een "front" in je tubing tussen de 20% en 80%. Dat mixt zich in-line doordat het simpelweg stroomt. En dŠt mixen kun je niet beÔnvloeden. toch?

ps. hoe bevalt Duitsland?

Prima. (full-time HPLC-en) Geplaatste afbeelding Nog 2.5 maandjes en ik ben weer thuis.

#13

Napoleon1981

    Napoleon1981


  • >1k berichten
  • 2399 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 13:56

Vergeet de invloed van de kolom niet, met het bijbehorende vloeistof volume wat in de porieen zit. Voordat die gradient zich dan echt ingesteld heeft ben je een paar kolom volumes verder.

Veranderd door Napoleon1981, 20 juli 2006 - 13:58


#14

rage against the machine

    rage against the machine


  • >250 berichten
  • 278 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 14:50

ps. hoe bevalt Duitsland?

Prima. (full-time HPLC-en) Geplaatste afbeelding Nog 2.5 maandjes en ik ben weer thuis.

Op welk merk HPLC als ik vragen mag?

#15

bteunissen

    bteunissen


  • >1k berichten
  • 1122 berichten
  • Ervaren gebruiker

Geplaatst op 20 juli 2006 - 15:07

Dat mag je zeker vragen.
Ik werk met HPLC¬īs van Dionex. Een `Summit¬ī en een `Ultimate 3000¬ī.

Bas





0 gebruiker(s) lezen dit onderwerp

0 leden, 0 bezoekers, 0 anonieme gebruikers

Ook adverteren op onze website? Lees hier meer!

Gesponsorde vacatures

Vacatures